[發明專利]一種利用白酒糟生產巨大芽孢桿菌的技術方法

有效

• 申請號: 202010848243.6
• 申請日: 2020-08-21
• 公開（公告）號: CN111944723B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 彭楠;常章兵;田建平;梁運祥
• 申請（專利權）人: 四川潤格生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/12;C12R1/11
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 陳巍

本發明公開了一種利用白酒糟生產巨大芽孢桿菌的技術方法，屬于發酵工程技術領域，包括：菌種活化、一級種子培養、白酒糟預處理、配制發酵培養基、固體發酵，得到巨大芽孢桿菌培養物；本發明發酵過程采用固態發酵生產巨大芽孢桿菌的方法，整個發酵過程遵循無菌操作規程，使巨大芽孢桿菌的固態培養生產實現了純種培養，可實現大規模放大生產。本發明涉及的發酵培養基解決了以白酒糟為主要原料發酵中存在的活菌數量低的問題，及液體培養中容易污染雜菌，營養利用率低，菌體及代謝物難分離的問題，大大提高了巨大芽孢桿菌的產量。

技術領域

本發明涉及發酵工程領域領域，特別是涉及一種利用白酒糟生產巨大芽孢桿菌的技術方法。

背景技術

隨著白酒工業的發展，白酒生產的副產品——白酒糟的利用已成為行業工作的重點。固態酒糟是白酒生產的主要副產物，也是白酒生產的主要污染物。由于一般采用高粱、小麥等原料，白酒糟的酸度高，含有豐富的蛋白質、氨基酸、維生素以及各種微量元素。實踐已經證明，白酒糟綜合利用程度直接影響企業的發展，如果處理不好，對環境的壓力是巨大的；而白酒糟加工飼料的水平又關系到國家飼料政策的落實。

長期以來，白酒糟主要是直接用作農村飼料，對促進農村飼養業的發展及生物鏈的良性循環，發揮了重要的作用。但是，鮮白酒糟的營養結構已經不能滿足飼養業科學喂養的要求及規模發展的需要，特別是鮮白酒糟含水量高達65％以上，貯存極其困難，管理不好極易霉變，大量的白酒糟任意堆放嚴重污染環境，困擾了企業的發展。

現有技術中已有一些專利等公開的文獻，利用白酒酒糟通過發酵制備培養物，并應用到飼料中，但是發酵過程中，一般采用多種類的混合菌：比如酵母菌、霉菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌等中的多種混合發酵培養，由于多個菌種的培養條件不一致，需要采用不同的培養條件進行2-3期的培養才能獲得最終的培養物，過程復雜和繁瑣；另外，雖然采用了多種菌種混合進行發酵，但是最終的活菌含量并不高，經分析可能因為多種菌的適宜培養條件差異較大，在不同培養條件下，容易造成部分菌種不適應環境而死亡，因此最終的活菌數量并不高，進而導致在飼料中的應用價值有待研究；由于上述的原因，還可能導致酒糟的發酵不徹底，得到的發酵培養物的蛋白含量提高并不是很明顯。因此，針對酒糟的特殊發酵條件，制備一種基于白酒糟的發酵培養物以高效的應用到動物飼料中很有必要。

巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)，為革蘭氏陽性菌，能形成芽孢，其芽孢的抗輻射能力強，能在葡萄糖、銨鹽培養基上生長，好氧，在自然界中分布廣泛。近年來研究表明，巨大芽孢桿菌是一種具有多種功能的安全高效、無殘留、無毒副作用的優良菌株，已廣泛地應用于生產生物有機肥、生產磷細菌肥料、農藥降解、抗生素合成以及酶工業等。

目前，在生產生物有機肥時，巨大芽孢桿菌只是作為混合發酵菌群之一，且常與枯草芽孢桿菌及其他微生物一起使用，未見單獨使用巨大芽孢桿菌發酵制備生物飼料的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用白酒糟生產巨大芽孢桿菌的技術方法，以解決上述現有技術存在的問題。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種利用白酒糟生產巨大芽孢桿菌的技術方法，包括以下步驟：

(1)菌種活化：將-80℃保存的菌種在固體種子培養基平板上劃線，在溫度為37-40℃的條件下培養20-24h；所述菌種為巨大芽孢桿菌；

(2)一級種子培養：將活化的巨大芽孢桿菌，用接種環挑取三到五環接種于液體種子培養基中，置于搖床中，震蕩培養20-24h，制得一級種子菌；

(3)白酒糟預處理：將白酒糟與水按照質量比1:1-1:2混合均勻，加入碳酸氫鈉調整pH值至6.5-7.0，接種一級種子菌，生料發酵，培養3-7天，得到預處理的白酒糟；

(4)配制發酵培養基；