[發明專利]一種動態檢測蛋白質O-GlcNAc糖基化的探針及其制備方法與應用在審
| 申請號： | 202010837783.4 | 申請日： | 2020-08-19 |
| 公開（公告）號： | CN111983238A | 公開（公告）日： | 2020-11-24 |
| 發明（設計）人： | 袁凱;丹尼爾.范.阿爾頓;張耀文;王丹丹;陳芳;孟陽;張娜;廖瀟嘯 | 申請（專利權）人： | 中南大學湘雅醫院 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 長沙智路知識產權代理事務所(普通合伙) 43244 | 代理人： | 謝珍貴 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 動態 檢測 蛋白質 glcnac 糖基化 探針 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種動態檢測蛋白質O-GlcNAc糖基化的探針，其特征在于，包括OGA失活突變體、蛋白標簽和熒光分子標記；所述OGA失活突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的探針，其特征在于，所述蛋白標簽為HaloTag。
3.根據權利要求1或2所述的探針，其特征在于，所述蛋白標簽連接在所述OGA失活突變體的N端。
4.根據權利要求3所述的探針，其特征在于，所述熒光分子標記為Halo Tag-AlexaFluor ligand。
5.權利要求1～4任一項所述探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)構建含有OGA失活突變體-蛋白標簽融合蛋白基因的表達載體；
2)將步驟1)構建的表達載體轉入大腸桿菌中進行表達；
3)對表達得到的融合蛋白的細胞進行熒光分子標記，獲得連接有熒光分子標記的OGA失活突變體-蛋白標簽融合蛋白。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所構建的融合蛋白基因表達的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.一種動態檢測蛋白質O-GlcNAc糖基化的試劑或試劑盒，其特征在于，包含權利要求1～4任一項所述的探針。
8.權利要求1～4任一項所述探針在動態檢測可逆性蛋白質O-GlcNAc糖基化方面的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，將所述探針通過顯微注射方式導入待測樣品中，對所述探針的熒光信號的動態變化進行實時成像觀察，動態監測蛋白質O-GlcNAc糖基化的水平變化。
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