[發明專利]一株雙色熒光蛋白標記鴨瘟病毒及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202010835946.5
• 申請日: 2020-08-19
• 公開（公告）號: CN113249340B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 陳柳;張存;倪征;華炯鋼;葉偉成;云濤;朱寅初
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/65;C12N15/63;C12N15/62;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一株雙色熒光蛋白標記鴨瘟病毒及其構建方法和應用，屬于分子生物學技術領域。本發明構建了一株雙色熒光蛋白標記鴨瘟病毒，將紅色熒光蛋白(RFP)與病毒囊膜蛋白gC融合，將青色熒光蛋白(CFP)與病毒衣殼蛋白UL35融合。采用rDEV?UL35CFP?gCmRFP感染細胞，UL35?CFP和gC?mRFP都以融合蛋白的形式表達，說明可同時可視化監測鴨瘟病毒囊膜糖蛋白和衣殼蛋白。因此，所述標記重組病毒為可視化研究病毒定位、病毒蛋白的運輸、病毒組裝、復制及病毒?宿主之間的相互作用以及免疫檢測奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一株雙色熒光蛋白標記鴨瘟病毒及其構建方法和應用。

背景技術

鴨瘟(Duckplague)又名鴨病毒性腸炎(Duck virus enteritis,DVE)，在鴨、鵝和其他雁形目禽類中急性、熱性、敗血性傳染病，病原體為鴨皰疹病毒1型病毒(DEV)。根據2012國際病毒分類委員會的分類將DEV歸類于皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科的馬立克氏病毒屬^[1]。

皰疹病毒是一類較大的雙鏈DNA病毒，由被膜、衣殼、核心、囊膜四個部分組成。DEV病毒粒子呈球形，直徑為120～180nm。一般來說，DEV基因組長約158kb，由獨特長區(UL)、IRS(內部重復序列)、TRS(末端重復序列)和獨特短區(US)組成，含78個開放閱讀框(ORF)，編碼不同的功能蛋白。其中有11個囊膜糖蛋白(gB/UL 27，gC/UL 44，gD/US6，gE/US8，gG/US4，g[Abbreviations DEV:duck enteritis virus；CEFs:chicken embryoembryoblasts；RFLPs:restriction fragment length polymorphisms；mRFP:redfluoreScentprotein；CFP:cyan fluoreScentprotein]H/UL22，gI/US7，gK/UL53，gL/UL1，gM/UL10 and gN/UL49.5)和7個衣殼蛋白(UL38/VP19C，UL18/VP23，VP26/UL35，UL21，UL25，UL19/VP5，UL6)^[2,3]。雖然在某些人類皰疹病毒中，這些蛋白的功能得到了廣泛的研究，但對于DEV蛋白知之甚少。生物信息學分析表明，DEV UL44編碼的gC蛋白由431個aa組成，預測分子量為47.35kDa^[4]，但是實際上，Hu Y等的研究表明gC分子量為55kDa，我們推測翻譯后的修飾使得gC分子量增加。研究表明gC在DEV感染細胞過程中起著吸附作用，在病毒出芽方面也發揮作用，gC缺失病毒蝕斑面積會增大^[5,6]。VP26是單純皰疹病毒1型最小的衣殼蛋白^[7]，DEV UL35基因編碼VP26蛋白，由117個aa組成，預測分子量為12.9kDa。DEV VP26被證實是細胞外成熟DEV病毒粒子的組成部分。亞細胞定位表明DEV感染細胞中，VP26首先定位于細胞質，之后轉移至細胞核內，并以點狀形式聚集于細胞核內^[8]。

參考文獻

[1]King AMQ,Adams MJ,Carstens EB,Lefkowitz EJ.Virus taxonomy:classification and nomenclature of viruses:Ninth Report of the InternationalCommittee on Taxonomy of Viruses.http://ictvonline.org/virusTaxonomy.asp？version＝2012bhcp＝1.2012.

[2]Li Y,Huang B,Ma X,Wu J,Li F,Ai W,Song M,Yang H.Molecularcharacterization of the genome of duck enteritis virus.Virology,2009,391:151-161.