[發明專利]一種NT-proBNP檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202010835910.7
• 申請日: 2020-08-19
• 公開（公告）號: CN111781385B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 李蘭芝;來祥兵;趙愿安;舒芹
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 江慧

本發明公開了一種NT?proBNP檢測試劑盒及其制備方法，所述試劑盒包括(1)磁微粒偶聯的NT?proBNP單克隆抗體，所述NT?proBNP單克隆抗體的表位處于42～46所包含的氨基酸區域內；(2)堿性磷酸酶標記的NT?proBNP單克隆抗體：采用堿性磷酸酶標記的表位處于13～24所包含的氨基酸區域內的第一NT?proBNP單克隆抗體和表位處于63～71所包含的氨基酸區域內的第二NT?proBNP單克隆抗體；該試劑盒正確度結果相對偏差應在±10.0％范圍內，精密度變異CV(％)均小于5％，檢測下限為5.00pg/mL，與羅氏的NT?proBNP試劑盒的線性相關系數r≥0.975。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種NT-proBNP檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

1988年，日本學者首次從豬腦內分離得到一種具有強力的利鈉、利尿、擴血管和降壓作用的多肽，命名為腦鈉肽或稱鈉尿肽(Brain?Natriuretic?Peptide，BNP)。當心肌細胞受刺激后，會產生含134個氨基酸的B型利鈉肽原前體(pre-proBNP)，隨后在相關酶的作用下切掉N端的信號肽序列，形成含108個氨基酸的BNP前體(proBNP)，后者在內切酶的作用下裂解為含有76個氨基酸、無生物活性的N端產物--N末端B型腦利鈉肽前體(NT-proBNP)和含有32個氨基酸、有活性的C端產物--B型利鈉肽(BNP)。美國在2004年和2008年分別發表了BNP臨床應用專家共識和國際NT-proBNP專家共識，系統闡述了BNP和NT-proBNP的生物學和臨床應用，已經被各級醫院和醫師廣泛用于臨床實踐，成為心血管病尤其是心力衰竭診斷和評估十分有用的生物標志物。但BNP半衰期短(22min)，體外穩定性差，而NT-proBNP半衰期相對較長(120min)，體外穩定性相對更強，在心力衰竭患者中的濃度也較BNP高，在有些情況下更有利于心力衰竭的診斷。

目前用于檢測NT-proBNP含量的方法主要由金標定性試驗、熒光免疫法、聯免疫吸附試驗(ELISA)和磁微粒化學發光免疫測定法(CLIA)。CLIA法靈敏度高、線性范圍廣、定量檢測結果精確、誤差小、自動化程度高、操作簡便，檢測速度快，一般30min內，甚至15min內出結果。但現有的NT-proBNP檢測試劑盒普遍存在靈敏度不高的問題。

因此，如何開發一種靈敏度高的NT-proBNP檢測試劑盒，成為亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明目的是提供一種NT-proBNP檢測試劑盒及其制備方法，檢測靈敏度高，抗干擾能力強。

為了實現上述目的，本發明提供了一種NT-proBNP檢測試劑盒，所述試劑盒包括磁微粒偶聯的NT-proBNP單克隆抗體和堿性磷酸酶標記的NT-proBNP單克隆抗體；

所述磁微粒偶聯的NT-proBNP單克隆抗體中NT-proBNP單克隆抗體的表位處于42～46所包含的氨基酸區域內；

所述堿性磷酸酶標記的NT-proBNP單克隆抗體包括均采用堿性磷酸酶標記的第一NT-proBNP單克隆抗體和第二NT-proBNP單克隆抗體，所述第一NT-proBNP單克隆抗體表位處于13～24所包含的氨基酸區域內，所述第二NT-proBNP單克隆抗體表位處于63～71所包含的氨基酸區域內。

進一步地，所述磁微粒表面的活性基團為-COOH或-NH₂，所述磁微粒的大小為0.8μm～3μm。

進一步地，所述磁微粒的濃度為2～8mg/mL，所述NT-proBNP單克隆抗體濃度為20～500ug/mL。

進一步地，所述第一NT-proBNP單克隆抗體和所述第二NT-proBNP單克隆抗體的濃度均為600～1200ug/mL。