[發明專利]一種滸苔中活性成分的制備方法

有效

• 申請號: 202010832170.1
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111848360B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 楊文鴿;王宸;張進杰;李超;徐大倫
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C07C37/82
• 分類號: C07C37/82;C07C39/08;C07C51/47;C07C65/03;C07D311/62;C07D473/12
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王磊

1.一種滸苔中活性成分的制備方法，其特征是，對條滸苔的醇提物進行乙酸乙酯萃取獲得條滸苔提取物，對條滸苔提取物高速逆流色譜進行分離純化，采用高速逆流色譜進行分離純化的步驟為，先采用在線收集模式獲得按先后順序獲得組分I、組分II、組分III、組分IV、組分V、組分VI，再采用循環逆流色譜模式對組分I分離至少6次獲得化合物3，采用循環逆流色譜模式對組分III分離至少5次，按照先后順序依次獲得化合物4、化合物1和化合物2；組分II為化合物4，組分IV為化合物5，組分V為化合物6，組分VI為化合物7；條滸苔的醇提物的提取過程為，將條滸苔粉末用55～65％的乙醇回流提取2～4次，每次2～4天，提取后過濾，再濃縮至無醇味獲得條滸苔的醇提物；

其中，高速逆流色譜的溶劑體系為由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按組成，正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水體積比為1:8.5～9.5:0.9～1.1:8.5～9.5；溶劑體系中，將正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合均勻后靜置分層，獲得上相溶劑和下相溶劑，將條滸苔提取物分別添加至上相溶劑和下相溶劑進行在線收集模式的分離；條滸苔提取物、上相溶劑和下相溶劑的添加比為35～45:0.9～1.1:1，mg：mL：mL；高速逆流色譜儀柱體積為250～350mL，上樣量150～250mg，轉速700～900轉/min，上相為固定相，下相為流動相，流速1.5～2.5mL/min，檢測波長254±2nm；

在線收集模式的進樣過程為：采用高速逆流色譜儀的進樣閥處于進樣狀態，將固定相用泵以一定流速灌滿色譜分離柱，停泵；開啟速度控制器，使高速流色譜儀的色譜分離柱正轉，轉速達700～900轉/min時，設置流動相流速為1.5～2.5mL/min，開始泵流動相，當達到流體動力學平衡后將溶解好的樣品用注射器注入逆流色譜儀進樣閥中，旋轉進樣閥為接柱狀態，使樣品進入色譜分離柱，然后根據檢測器紫外光譜圖接收組分I-VI；

組分I的接收時間為40～50min，組分II的接收時間為60～80min，組分III的接收時間為80～100min，組分IV的接收時間為105～115min，組分V的接收時間為120～160min，組分VI的接收時間為290～340min；化合物3的接收時間為580～640min；化合物4的接收時間為670～730min，化合物1的接收時間為730～780min，化合物2的接收時間為780min～840min；

化合物1為對苯二酚，化合物2為沒食子酸，化合物3為沒食子兒茶素，化合物4為咖啡因，化合物5為(-)-表兒茶素，化合物6為(-)-表兒茶素沒食子酸酯，化合物7為表兒茶素沒食子酸酯。

2.如權利要求1所述的滸苔中活性成分的制備方法，其特征是，采用高效液相色譜對各步驟中產物進行分析。

3.如權利要求2所述的滸苔中活性成分的制備方法，其特征是，高效液相色譜的條件為：色譜柱為C₁₈柱，紫外檢測波長280±2nm，流速：0.5～1.5mL/min，進樣量：5～15μL，流動相A相為乙腈，流動相B相為0.2％甲酸溶液。

4.如權利要求3所述的滸苔中活性成分的制備方法，其特征是，梯度條件為：0min，10％A；0–10min，10–40％A；10–20min，40-55％A。