[發明專利]一種復合微球的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202010831794.1
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111925556A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 孫振華;黃珂;李英文;施坤寧;楊慧瑩;蔣雪峰
• 申請（專利權）人: 江蘇普瑞康生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C08J9/36
• 分類號: C08J9/36;C08J9/28;C08J9/26;C08L67/04;C08L89/00;C12N5/00
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明涉及一種復合微球的制備方法及其應用。本發明的聚乳酸?羥基乙酸/明膠復合微球包括：聚乳酸?羥基乙酸(PLGA)基礎微球和明膠；其中所述明膠與所述聚乳酸?羥基乙酸基礎微球的表面通過共價鍵結合，相對于所述聚乳酸?羥基乙酸/明膠復合微球的總質量，所述明膠的質量為0.00001～10％。本發明的聚乳酸?羥基乙酸/明膠復合微球的制備方法包括：制備具有一定尺寸的聚乳酸?羥基乙酸基礎微球，活化聚乳酸?羥基乙酸基礎微球；將基礎微球與明膠通過共價鍵連接。本發明的聚乳酸?羥基乙酸/明膠復合微球用于培養細胞的用途，聚乳酸?羥基乙酸/明膠復合微球對細胞的粘附效果遠好于聚乳酸?羥基乙酸基礎微球。

技術領域

本發明涉及生物組織工程細胞支架材料領域，涉及一種復合微球的制備方法及其應用，具體而言，涉及一種聚乳酸-羥基乙酸/明膠復合微球、其制備方法和用途。

背景技術

聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)有良好的生物相容性和生物降解性且降解速度可控，在生物醫學工程領域有著廣泛的用途。在美國，PLGA已通過FDA認證，被正式作為藥用輔料收錄進美國藥典。市售的治療晚期前列腺癌的LupronDepot即是選用PLGA充當藥物載體。傳統的PLGA微球多為微米級的實心球，已被廣泛用作人工導管，藥物緩釋載體，組織工程支架材料和細胞培養微載體等。近年來，在組織工程支架材料和細胞培養微載體領域中，為了增大支架材料的比表面積并由此改善細胞的粘附，還開發了基于PLGA的微球結構。然而，由于PLGA本身的疏水性，又缺乏細胞識別位點，所以對細胞親和性差，尤其在三維細胞培養時，細胞依然很難在由PLGA制成的支架材料的表面黏附伸展。

為此，對由PLGA制成的微球結構的修飾得到重視。例如，Nojehdehian H等人(2009)記載了表面修飾了多聚賴氨酸同時內部裝載視黃酸(RA)的PLGA微球，其用于多功能胚胎腫瘤干細胞P19的培養(參考引用文獻1)。然而，該文獻中制備得到的微球的尺寸大約為13～100μm，難以得到更大的粒徑且粒徑大小不均一，不利于細胞的培養。

Tsung MJ(2001)報道了用于遞送地塞米松的表面修飾明膠的PLGA微球，但其制備出的微球小于10μm，無法用于細胞粘附(參考引用文獻2)。另外，該技術采用2-甲基戊烷作為致孔劑，但是2-甲基戊烷有毒，大量生產時殘留較多，毒性大，生物相容性差。

張天柱(2013)記載了表面修飾了膠原蛋白的PLGA微球，其用于卵巢癌H08910細胞培養(參考引用文獻3)。膠原是具有生物活性的蛋白質，在大量生產時不易于控制生產環境，容易失活；同時，膠原易在體內引起免疫原性，限制其應用。與膠原相比，明膠是另一類細胞培養用支架材料，一種天然的高分子材料，其結構與生物體組織結構相似，具有良好的生物相容性。明膠的氨基酸組成與膠原類似，但沒有生物活性。明膠的凝膠性、固水性、粘合性和溶解性等多種特性，令其在醫藥行業有著廣泛的用途。然而，明膠單獨使用時會溶于熱水，在冷水中會吸水膨脹，雖然可以靜態培養細胞，但在三維動態培養中易溶解，導致其穩定性差。

Graves R.A.等(2006)用乙醇作為共溶劑制備的PLGA微膠囊(microcapsules)的直徑小于100μm，可提高腦啡肽的裝載和緩慢釋放(參考引用文獻4)。但是，由于其尺寸小，該PLGA微膠囊仍不適于細胞增殖。基于上述，人們亟待提升基于PLGA的用于細胞培養用的材料性能。

引用文獻