[發(fā)明專(zhuān)利]一種新型冠狀病毒N蛋白抗原變體及其在新型冠狀病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010831509.6
• 申請(qǐng)日: 2020-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112028977A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔大祥;田靜;王侃;劉巖磊;梁輝;李雪玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/165
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/165;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/532;G01N33/531
• 代理公司: 上海東亞專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

本發(fā)明提供一種新型冠狀病毒N抗原變體及其在新冠抗體檢測(cè)中的應(yīng)用，涉及N蛋白重要抗原表位多肽的變體，這些變體降低了新型冠狀病毒N蛋白作為捕獲抗原與其它冠狀病毒抗體如SARS、人流感冠狀病毒抗體的非特異性反應(yīng)。所述的多肽具有冠狀病毒N蛋白表位肽活性并且在C端添加半胱氨酸殘基；所述的突變發(fā)生的氨基酸殘基位點(diǎn)選自：第342的賴氨酸、第347的賴氨酸、第387的賴氨酸、第388的賴氨酸突變?yōu)橥葱暂^低的氨基酸；所述的N蛋白340?419多肽序列如SEQ ID NO 7所示。本發(fā)明還披露了所述變體的抗原組合物、用途和方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種新型冠狀病毒N蛋白抗原變體及其在新型冠狀病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用，該抗原變體在有效捕獲病毒抗體同時(shí)，大幅降低了因全長(zhǎng)N蛋白的非特異性反應(yīng)所造成的病毒抗體檢測(cè)的假陽(yáng)性問(wèn)題，有效提高了新型冠狀病毒抗體檢測(cè)的專(zhuān)屬性。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒（novel Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）是一種具有急性呼吸道傳染性的RNA病毒。截至2020年7月底，新型冠狀病毒已引起全球約1800萬(wàn)人感染，69萬(wàn)人死亡。

表面有冠狀刺突的球狀新型冠狀病毒外部是由多種蛋白組成的殼，分別是刺突糖蛋白（S，Spike protein）、小包膜糖蛋白（E，Envelop Protein）、膜糖蛋白（M, MembraneProtein）。病毒內(nèi)部是由N蛋白與病毒RNA形成核糖核蛋白復(fù)合物，N蛋白是一種多功能結(jié)構(gòu)蛋白，具有增強(qiáng)病毒基因組轉(zhuǎn)錄、破壞各種宿主細(xì)胞活動(dòng)而對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生毒性等不同特征。

新型冠狀病毒的N蛋白、E蛋白和S蛋白在病毒感染人體后，刺激漿細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體，具有較強(qiáng)的抗原性，被廣泛應(yīng)用于新冠抗體血清學(xué)檢測(cè)產(chǎn)品中。截至2020年5月底，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局一共應(yīng)急審批通過(guò)了44個(gè)新冠檢測(cè)試劑及設(shè)備，其中有18個(gè)新冠抗體血清學(xué)檢測(cè)產(chǎn)品。獲批的新冠病毒抗體檢測(cè)試劑盒都以常規(guī)冠狀病毒抗原S和N蛋白，尤其是以N蛋白作為抗體捕獲抗原。

N蛋白作為抗體捕獲蛋白有諸多優(yōu)點(diǎn)，分子量相對(duì)較小，沒(méi)有糖基化，使其容易在成本較低的原核或低等真核表達(dá)系統(tǒng)中得到高效表達(dá)。更重要的是N蛋白抗原性強(qiáng)，根據(jù)SARS的血清學(xué)研究，利用SARS病毒N蛋白的抗體檢測(cè)試劑具有很高的靈敏度，90-100%的SARS病人血清能與N蛋白產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，而僅有78%的SARS陽(yáng)性病人血清與S蛋白反應(yīng)。N蛋白是最保守和最穩(wěn)定的蛋白。SARS-CoV-2的N蛋白與SARS-CoV N蛋白具有90％的氨基酸序列同一性，與造成季節(jié)性流感的人類(lèi)冠狀病毒HCoVs，如HCoV-OC43和HCoV-229E等也有極高同源性。Gorse等人在2010年發(fā)表文章揭示全球有90%的人群具有針對(duì)流感人類(lèi)冠狀病毒的抗體。

Woo等研究者在2004年的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)使用全長(zhǎng)N蛋白檢測(cè)SARS病毒抗體時(shí)，假陽(yáng)性率高達(dá)87%（在檢測(cè)陽(yáng)性的33個(gè)樣本中有29個(gè)為假陽(yáng)性）。而2006年Maache等學(xué)者的一項(xiàng)研究也指出N蛋白用于測(cè)SARS抗體完全無(wú)法區(qū)分陽(yáng)性血清和健康人血清。而基于S蛋白的抗體檢測(cè)則具有較低的假陽(yáng)性率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是：提供一種新型冠狀病毒N蛋白抗原變體，在有效捕獲病毒抗體同時(shí)，大幅降低了因全長(zhǎng)N蛋白的非特異性反應(yīng)所造成的病毒抗體檢測(cè)的假陽(yáng)性問(wèn)題。

本發(fā)明的再一目的在于：提供上述變體在新型冠狀病毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種冠狀病毒N蛋白的抗原肽，在有效捕獲病毒抗體同時(shí)，大幅降低了因全長(zhǎng)N蛋白的非特異性反應(yīng)所造成的病毒抗體檢測(cè)的假陽(yáng)性問(wèn)題，有效提高了新型冠狀病毒抗體檢測(cè)的專(zhuān)屬性。

本發(fā)明提供了一種多肽，所述的多肽是冠狀病毒N蛋白表位肽的突變體，具有冠狀病毒N蛋白表位肽活性并且在C端添加半胱氨酸殘基，在本發(fā)明中稱(chēng)為冠狀病毒N蛋白表位肽變體；

突變發(fā)生的氨基酸殘基位點(diǎn)選自：