[發明專利]一種新型冠狀病毒組合物及其試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202010831460.4
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111893217A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 孫子奎;王展;朱月艷;徐福橋
• 申請（專利權）人: 上海派森諾生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂楚姍

本發明公開了一種新型冠狀病毒組合物，為基于Taqman?LNA熒光PCR檢測新冠病毒用組合物，所述組合物包括有：如SEQ ID NO:1?2所示的第一引物對；如SEQIDNO.3所示的第一探針；如SEQIDNO.4?5所示的第二引物對；如SEQIDNO.6所示的第二探針。本法還公開了試劑盒和檢測方法。本發明通過在TaqMan探針的基礎上使用LNA修飾的堿基，減少了探針分子長度，增加了探針分子的親和力，提高了檢測靈敏度、特異性，且同時檢測ORF1ab和N基因時大大提高了其準確性，改善了SARS?CoV?2的核酸陽性檢出率低的問題，對于疫情的診療有積極的意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測領域，具體涉及一種新型冠狀病毒組合物及其試劑盒及其檢測方法。

背景技術

新型冠狀病毒(2019-nCoV，SARS-CoV-2)，為新發現的第7種可以感染人類的冠狀病毒，該病毒在分類學上屬于冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)中的β類型冠狀病毒，具有囊膜和刺突細胞學特征基因組為線性單股正鏈的RNA((+)ssRNA)病毒。SARS-CoV-2從2019年末發現至今，在全世界爆發，在全球累積造成超過1900萬人感染，累積造成超過70多萬人死亡，為國際公共衛生事件。

在目前《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中，SARS-CoV-2的核酸的檢出仍是唯一確診依據，在診療方案中了明確核酸檢測的方式有兩種：(1)實時熒光定量PCR(qPCR)檢測核酸陽性；(2)病毒基因測序，測序結果與已知SARS-CoV-2高度同源。病毒基因測序法雖然結果更為準確，但是其檢測周期長、成本高、對實驗室要求高，很難大規模運用臨床。

由于基因測序法存在上述限制，所以臨床大規模采取qPCR方法來進行檢測。相對基因測序而言，qPCR方法具有快速、成本低等優勢。

據報道，自從qPCR檢測試劑大面積用于臨床診斷以來，初期核酸陽性檢出率只有30-50％；此外，更有醫療機構報道，個別病例在不同時間3次以上結果由陰性轉為陽性；且在國內外網上爆出多個報道，WHO提供的引物探針存在特異性問題，美國CDC提供的檢測試劑存在檢測效果差的問題。以上這些情況的發生為臨床診斷和疾病控制帶來極大困擾。

發明內容

為了克服現有技術的上述缺陷，本發明的目的在于提供一種新型冠狀病毒組合物及其試劑盒及其檢測方法。

為了實現本發明的目的，所采用的技術方案是：

一種新型冠狀病毒組合物，為基于Taqman-LNA熒光PCR檢測新冠病毒用組合物，其中，所述組合物包括有：

如SEQ ID NO:1-2所示的第一引物對，所述第一引物對用于特異性地擴增SARS-CoV-2的ORF1ab基因；

如SEQIDNO.3所示的第一探針，所述第一探針為用于檢測所述第一引物對的擴增產物,所述第一探針的第4、8、12、15、17個堿基進行LNA修飾；

如SEQIDNO.4-5所示的第二引物對，所述第二引物對用于特異性地擴增N基因；

如SEQIDNO.6所示的第二探針，所述第二探針用于檢測所述第二引物對的擴增產物，所述第二探針的第3、6、9、12、15個堿基進行LNA修飾。

一種基于Taqman-LNA熒光PCR檢測新冠病毒用試劑盒，其中，所述試劑盒包括有所述組合物。

在本發明的一個優選實施例中，所述試劑盒中還包括PCR反應液或RT-酶混合液或陽性質控品中的任意一種或多種。

在本發明的一個優選實施例中，所述PCR反應液包括MgCl2或dUTP反應液中的任意一種或多種。

在本發明的一個優選實施例中，所述RT-酶混合液包括RT-酶或Taq酶或UNG酶中的任意一種或多種。