[發明專利]基于分子信標的2019-nCoV核酸恒溫擴增引物和分子信標、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010830834.0
• 申請日: 2020-08-18
• 公開（公告）號: CN111826469A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 朱友杰;孔繁平
• 申請（專利權）人: 杭州昱鼎生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 常州易瑞智新專利代理事務所(普通合伙) 32338
• 代理人: 孫盼盼

本發明公開一種基于分子信標的2019?nCoV核酸恒溫擴增引物和分子信標、試劑盒及檢測方法，2019?nCoV病毒引物包含2019?nCoV病毒的ORF1ab基因引物序列及N基因引物序列；分子信標包含ORF1ab基因分子信標探針和N基因分子信標探針；試劑盒包括上述的2019?nCoV病毒引物和分子信標，以及NASBA擴增緩沖液、NASBA酶混合液；利用試劑盒進行檢測方法包括以下步驟：首先制備NASBA擴增緩沖液，制備NASBA酶混合液，制備引物混合液，制備RNA樣本；將所有溶液進行混合反應并孵育，最后使用熒光檢測儀完成檢測。本發明展現出高特異性和高靈敏度的檢測性能，節約大量的實驗時間。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種基于恒溫擴增技術和分子信標技術，快速 檢測2019-nCoV病毒的引物和分析信標、試劑盒及檢測方法。

背景技術

目前，較為常用的實驗室診斷技術可分為病毒細胞培養技術、影像學檢查、電鏡檢查、血清學檢查和分子生物學檢測。其中，病毒細胞培養分離是目前最準確的方法，但 缺乏高通量篩選所需的靈敏度和速度，可能導致耽誤病情；ELISA等血清學方法特異較 低無法確診。分子生物學檢測手段現以qRT-PCR法最為常見，該法具備靈敏度高、特 異性好、線性范圍寬并且可以準確定量的優點。已經廣泛運用在冠狀病毒的檢測中，并 得到了良好的檢出率和陽性符合率。但由于目前PCR儀價格較為高昂，基本在三甲醫 院實驗室中具備此條件，且對操作人員的技術要求較高，無法在基層推廣使用。在疫情 大規模爆發的時候無法高效率的對大面積人群進行篩查。

發明內容

發明目的：本發明目的在于針對現有技術的不足，提供一種基于分子信標的2019-nCoV核酸恒溫擴增引物和分子信標、試劑盒及檢測方法。

實現本發明的技術方案是：

本發明所述一種引物和分子信標，檢測位點包含2019-nCoV病毒的ORF1ab基因及N基因，所述ORF1ab基因引物序列如ORF1ab-F(SEQ ID NO.1)和ORF1ab-R(SEQ ID NO.2)所示；所述N基因引物序列如N-F(SEQ ID NO.3)和N-R(SEQ ID NO.4)所 示；所述ORF1ab基因分子信標探針如ORF1ab-P(SEQ ID NO.5)所示，所述N基因 分子信標探針如N-P(SEQ IDNO.6)所示。

引物序列表為：

ORF1ab基因引物序列：ORF1ab-F：

TAATACGACTCACTATAGGGCCCTGTGGGTTTTACACTTA(SEQ ID NO.1)；

ORF1ab基因引物序列：ORF1ab-R：

TAATACGACTCACTATAGGGACGATTGTGCATCAGCTG(SEQ ID NO.2)；

N基因引物序列：N-F：

TAATACGACTCACTATAGGGACATTGGCACCCGCAAT(SEQ ID NO.3)；

N基因引物序列：N-R：

TAATACGACTCACTATAGGGGAGGAACGAGAAGAGGC(SEQ ID NO.4)；

ORF1ab基因分子信標探針：ORF1ab-P：

CCAGGCTGTGGAAAGGTTATGGCTGGCCTGG(SEQ ID NO.5)；

N基因分子信標探針：N-P：

CCAGGCTAACAATGCTGCAATCGTGGCCTGG(SEQ ID NO.6)。