[發明專利]川芎均一性多糖及其提取方法與應用

在審

• 申請號: 202010829599.5
• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN111777693A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 鮑依稀;鐘誠;劉子靖;張旭裕;蒲有為
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬第二醫院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00;A61P37/02;A61P1/16
• 代理公司: 重慶市嘉允啟行專利代理事務所(普通合伙) 50243
• 代理人: 胡柯

1.一種川芎均一性多糖的提取方法，其特征在于，具體步驟如下：

1)以川芎為原材料，粗提取川芎粗多糖；

2)對川芎粗多糖提取物，采用DEAE Sepharose^TMFast Flow柱層析技術提取得到川芎多糖LCXP-1、LCXP-3；

3)對川芎多糖LCXP-1、LCXP-3，采用Sephacryl^TMS-300 High Resolution柱層析技術提取得到川芎均一性多糖LCXP-1a、LCXP-3a。

2.如權利要求1所述的一種川芎均一性多糖的提取方法，其特征在于，步驟1)中所述粗提取川芎粗多糖的具體方法如下：

1-1)熱水提取步驟：將原料川芎在粉碎機里粉碎，得到川芎粉末；在熱水提取反應杯中加入川芎粉末，再加入蒸餾水I，置于75℃～85℃水浴中攪拌1.5～2.5h，過濾收集提取液I；殘渣中再加入蒸餾水II，置于75℃～85℃水浴中攪拌1.5～2.5h，過濾收集提取液II；合并提取液I和提取液II，離心去除沉淀，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮，得到川芎水溶性粗提取物；川芎粉末、蒸餾水I和蒸餾水II的重量份數比為：川芎粉末150～250份、蒸餾水I 1500～2500份、蒸餾水II 1200～2000份；

1-2)乙醇沉淀步驟：取冷卻后的川芎水溶性粗提取物，加入4倍體積的無水乙醇，同時不斷攪拌，置于4℃環境，沉淀16～24h，離心取沉淀物I；

1-3)去除蛋白步驟：取沉淀物I，用蒸餾水III溶解，加入其體積五分之一的sevag試劑，電動快速攪拌8～12min，再4000rpm離心處理3～5min；取上清液I重復加入其體積五分之一的sevag試劑攪拌離心處理，直到蛋白除盡，得到上清液II；沉淀物I和蒸餾水III的重量份數比為：沉淀物I 10～20份、蒸餾水III 25～50份；

1-4)透析濃縮冷凍干燥步驟：取上清液II，選取截留分子量為3000Da～4000Da的透析袋，在純水中透析36～48h；在旋轉蒸發儀上減壓濃縮，并在凍干機內冷凍干燥，制得川芎粗多糖。

3.如權利要求2所述的一種川芎均一性多糖的提取方法，其特征在于，

步驟1-1)中水浴溫度都為80℃、攪拌時間都為2h、川芎粉末200份、蒸餾水I 2000份、蒸餾水II 1600份；

步驟1-2)中沉淀時間24h；

步驟1-3)中攪拌時間10min、離心時間3min、沉淀物I 10份、蒸餾水III 25份；

步驟1-4)中截留分子量3500Da、透析時間48h。

4.如權利要求1所述的一種川芎均一性多糖的提取方法，其特征在于，步驟2)中所述采用DEAE Sepharose^TMFast Flow柱層析技術提取川芎多糖的具體步驟如下：

2-1)預處理：向柱管中加入用于防止氣泡的蒸餾水5ml，將DEAE Sepharose^TMFast Flow加入柱管中，靜置18～24h；用0.4～0.6mol/L的HCl洗1個柱體積，速度為6～8mL/min，時間為30～50min；再用超純水平衡3～5個柱體積，速度為6～8mL/min，時間為90Min～130Min；

2-2)取川芎粗多糖，溶于蒸餾水IV中，以速度3～4mL/min上樣，分別用水、0.15mol/L和0.3mol/L的NaCl洗脫40管，8mL/管，速度6～8mL/min，分別得到洗脫液LCXP-1、洗脫液LCXP-2和洗脫液LCXP-3；川芎粗多糖和蒸餾水IV的重量份數比分別為：川芎粗多糖0.3～0.4份、蒸餾水IV 25～30份；

2-3)使用苯酚-硫酸法檢測洗脫液LCXP-1、洗脫液LCXP-2和洗脫液LCXP-3的吸光度，選取吸光度為單峰的洗脫液LCXP-1、洗脫液LCXP-3。

2-4)對于洗脫液LCXP-1和洗脫液LCXP-3，選取截留分子量為7500Da～8000Da的透析袋，在純水中透析36-48h，其間隔4h換一次水；收集透析袋內的液體，濃縮后凍干，保存于-20℃環境，分別得到川芎多糖LCXP-1和LCXP-3。