[發(fā)明專利]一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010828954.7
• 申請(qǐng)日: 2020-08-18
• 公開（公告）號(hào): CN112014336A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳傳霞;逯一中;倪朋娟;姜媛媛;張成會(huì);王波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/33;G01N21/78;G01N1/38
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 王翠翠

1.一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成過氧化氫，f-FeNC單原子納米酶能夠通過催化過氧化氫將無色的3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺氧化成顯藍(lán)色的3,3',5,5'-氧化態(tài)四甲基聯(lián)苯胺，催化顯色反應(yīng)將檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行放大，在652 nm處產(chǎn)生紫外吸收峰，測(cè)試紫外光譜；葡萄糖濃度越高，溶液顏色越深，吸光度值越大，從而確定葡萄糖的含量，葡萄糖為α-葡萄糖苷酶底物的產(chǎn)物，從而確定α-葡萄糖苷酶的活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將樣品、α-葡萄糖苷酶和GOx混勻后，37℃孵育40 min，依次加入醋酸-醋酸鈉緩沖、f-FeNC溶液和TMB溶液，室溫反應(yīng)后，測(cè)量其紫外可見吸收光譜；利用吸光度值與葡萄糖濃度進(jìn)行線性擬合，測(cè)定葡萄糖的含量，得到α-葡萄糖苷酶活性的線性范圍；

（2）測(cè)定待測(cè)樣品的吸光度值，確定α-葡萄糖苷酶活性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，α-葡萄糖苷酶活性線性范圍為：0.005-0.1 U/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，f-FeNC單原子納米酶的制備方法為：將0.1 g五水合檸檬酸鐵加入到30 mL甲酰胺中，超聲處理30 min后轉(zhuǎn)移到40 mL反應(yīng)釜中，180℃下反應(yīng)12小時(shí)，獲得的黑色產(chǎn)物經(jīng)超純水離心清洗三次（10000 rpm，10 min）后，冷凍干燥得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，所述的步驟（1）的過程為：將100μL 樣品(10 mmol/L)、100 μL系列活力的α-葡萄糖苷酶和50 μL GOx (0.1 mg/mL)混勻后，37℃孵育40 min，依次加入700 μL醋酸-醋酸鈉緩沖(0.2 mol/L, pH 4.4)、5 μL f-FeNC溶液(0.05 mg/mL)和30 μL TMB溶液(10 mM)，室溫反應(yīng)20 min后，測(cè)量其紫外可見吸收光譜。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，所述的系列活力的α-葡萄糖苷酶為0.005-0.2 U/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于級(jí)聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)α-葡萄糖苷酶活性的普適性方法，其特征在于，所述的樣品中的底物為NPGlu、蔗糖或麥芽糖。