[發明專利]重組抗RANKL抗體IgG2型的二硫鍵異構體及其純化方法有效
| 申請號： | 202010828720.2 | 申請日： | 2020-08-18 |
| 公開（公告）號： | CN111704670B | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發明（設計）人： | 梅菲;孫小偉;任杰;方鵬;陳坤;游猛;譚小釘 | 申請（專利權）人： | 邁威（上海）生物科技股份有限公司;江蘇邁威康新藥研發有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/28 | 分類號： | C07K16/28;C07K1/113 |
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| 地址： | 201210 上海市浦東新區自由貿*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 rankl 抗體 igg2 二硫鍵 異構體 及其 純化 方法 | ||
1.一種抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：以含有抗RANKL單克隆抗體的細胞培養上清液為對象，依次采用親和層析、低pH滅病毒、陰離子交換層析、陽離子交換層析、納濾除病毒、超濾濃縮進行純化，獲得純化的抗RANKL單克隆抗體原液，對純化的抗RANKL單克隆抗體進行二硫鍵異構體轉化；
其中，所述二硫鍵異構體轉化是在6mM二硫蘇糖醇（DTT）和1mM亞硫酸鈉（Na2SO3）的反應體系中進行；所述抗RANKL單克隆抗體為輕鏈可變區如SEQ ID NO:1 所示，重鏈可變區如SEQ ID NO:2 所示的重組人源抗RANKL抗體IgG2型。
2.如權利要求1所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：所述二硫鍵異構體轉化步驟的反應體系中，重組人源抗RANKL抗體IgG2型的濃度為1-10mg/mL。
3.如權利要求1所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：所述二硫鍵異構體轉化步驟的反應體系中，重組人源抗RANKL抗體IgG2型的濃度為3mg/mL，DTT的濃度為6mM、Na2SO3的濃度為1mM。
4.如權利要求1-3任一所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：所述二硫鍵異構體轉化步驟的反應體系中還包含低濃度變性劑，所述低濃度變性劑選自1-2M尿素或0.5-1M鹽酸胍。
5.如權利要求1-3任一所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：當所述二硫鍵異構體轉化步驟的反應體系中不包含變性劑時，獲得均一的重組人源抗RANKL抗體IgG2型的二硫鍵異構體為IgG2-B型；當所述二硫鍵異構體轉化步驟的反應體系中包含變性劑時，獲得均一的重組人源抗RANKL抗體IgG2型的二硫鍵異構體為IgG2-A型。
6.如權利要求1-3任一所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：所述對純化的抗RANKL單克隆抗體進行二硫鍵異構體轉化的步驟是在2-8℃下處理24-72小時。
7.如權利要求6所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于：所述對純化的抗RANKL單克隆抗體進行二硫鍵異構體轉化的步驟是在4℃下處理48小時。
8.如權利要求1所述抗RANKL單克隆抗體的純化方法，其特征在于所述純化的抗RANKL單克隆抗體原液與相同濃度的商購地諾單抗（Denosumab）相比，具有80-130%的相對活性。
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