[發明專利]CD29抗體在鑒定、分選人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞中的應用

在審

• 申請號: 202010826698.8
• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN112063581A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 高雪華;孫雯;劉倩伶;曾焰;江蕊利;侯爽;海泉
• 申請（專利權）人: 成都清科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;G01N33/569
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 傅曉

本發明公開了CD29在鑒定、分選人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞中的應用方法。本發明中的應用方法是先分別用多種細胞表面標志物標記人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)，然后用流式細胞儀進行檢測，考察各標記物標記后流式檢測的合格率以及穩定性，發現通用標準中的標記物CD90表達不穩定，而CD29標記PMSCs后檢測均合格，并且經過重復試驗發現，CD29具有良好的檢測穩定性，檢測合格率100％，表明CD29對PMSCs具有良好且穩定的鑒定效果，可替代CD90用于PMSCs的快速、準確鑒定。

技術領域

本發明屬于間充質干細胞鑒定技術領域。

背景技術

在生物醫學的基礎研究或者臨床研究中，分析某一個特定細胞群的細胞數量和功能變化的時候，都需要將這群細胞與其他細胞分開，這時就需要根據不同的細胞表面標志物將其分開。細胞表面標志物是指鑲嵌在細胞膜脂質雙層結構中的膜蛋白，包括膜抗原、膜受體及其他分子，CD分子(Cluster of Differentiation，分化簇或分化群，也叫白細胞分化抗原)是最常用的細胞表面標志物之一，指應用以單克隆抗體鑒定為主的方法，將來自不同實驗室的單克隆抗體所識別的同一分化抗原，包括細胞的特定形態、特定功能和發育階段。

2006年，國際細胞治療協會(ISCT)規范了間充質干細胞的定義。只有同時符合以下三個標準的細胞，才能稱之為間充質干細胞(主要是骨髓來源的間充質干細胞)：

①貼壁生長；

②細胞表面表達一些特異性抗原(標記物)：

陽性(≥95％)：CD90、CD105、CD73，

陰性(≤2％)：CD45、CD34、CD11b/CD14、CD19/CD79、HLA-DR；

③具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞分化的能力。

實際實驗室操作中，通過組織貼壁培養法培養出的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)，觀察貼壁生長的干細胞形態正常，檢測的除CD90外其他細胞表面標志物的結果正常，用相應試劑盒評價其向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞分化的能力正常，結果唯獨顯示，CD90表面標志物穩定性較差，合格率僅為26.19％(統計份數42份)，即按照國際細胞治療協會(ISCT)公開的標準并不能有效鑒定出合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)。并且相關文獻的實驗結果也指出，人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞表面標志物CD90的陽性表達量大概率出現陽性表達不足95％的情況。這給鑒定、分選合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)帶來了困難，也是進一步研究人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)功能的障礙。因此，篩選出一種在PMSCs細胞表面高表達且表達穩定性強的細胞表面標志物，可用于準確鑒定、分選合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)，作為合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞PMSCs的鑒定標準，具有十分重要的意義。

發明內容

本發明篩選出一種在人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)細胞表面高表達且表達穩定性強的細胞表面標志物，可替代CD90用于準確鑒定、分選合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)，作為合格的人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞PMSCs的鑒定指標之一。

為了達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：分別用多種細胞表面標志物標記人胎盤平滑絨毛膜源間充質干細胞(PMSCs)，然后用流式細胞儀進行檢測，考察各標記物標記后流式檢測的合格率以及穩定性，最終發現CD29標記PMSCs后檢測均合格，并且經過重復試驗發現，與CD90相比CD29具有良好的檢測穩定性，檢測合格率100％，表明CD29對PMSCs具有良好且穩定的鑒定效果，可替代CD90用于PMSCs的快速、準確鑒定。