[發(fā)明專利]一株產(chǎn)抗菌肽的海洋芽孢桿菌及其發(fā)酵方法和應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010824328.0 | 申請(qǐng)日： | 2020-08-17 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111733117B | 公開（公告）日： | 2020-12-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 彭健;方素云;胡曉珂;閔軍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;中科海洋微生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院（山東）有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N1/20 | 分類號(hào)： | C12N1/20;C12P21/00;C05F11/08;A23K20/195;A23K20/147;A23K50/80;A23K50/75;C02F1/50;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429 | 代理人： | 潘劍敏 |
| 地址： | 264003 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一株產(chǎn) 抗菌 海洋 芽孢 桿菌 及其 發(fā)酵 方法 應(yīng)用 | ||
1.一株產(chǎn)抗菌肽的海洋芽孢桿菌，其特征在于，該海洋芽孢桿菌是從采自于威海市南海新區(qū)某養(yǎng)殖池的底泥樣品中分離、純化得到的枯草芽孢桿菌M252，其對(duì)溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌均具有明顯的抑制效果，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2020057，保藏日期為2020 年03月24日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢。
2.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)抗菌肽的海洋芽孢桿菌的發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：將枯草芽孢桿菌M252純化后接入一級(jí)種子罐中，一級(jí)種子罐中的培養(yǎng)基的配方為：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化鈉1g/L、用凈化的海水配制，35℃、200rpm培養(yǎng)40h，得一級(jí)種子液；
步驟2：將一級(jí)種子液接入二級(jí)種子罐中，二級(jí)種子罐中的培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖40g/L、酵母膏10g/L、玉米漿5g/L、硫酸銨1g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀1.5g/L、氯化鈣1g/L、用凈化的海水配制，35℃、300rpm培養(yǎng)20h，得二級(jí)種子液；
步驟3：將二級(jí)種子液接入固體發(fā)酵罐中，固體發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基的配方為：氯化鈉5g/kg、磷酸二氫鉀2g/kg、硫酸銨2g/kg、余量為麩皮、米糠或豆粕、含水量控制在20-40%，控制濕度30%，35℃、8rpm培養(yǎng)56h，然后低溫鼓風(fēng)干燥，得抗菌肽固劑。
3.采用權(quán)利要求2所述的發(fā)酵方法發(fā)酵得到的抗菌肽固劑的應(yīng)用，其特征在于，作為飼料添加劑使用。
4.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)抗菌肽的海洋芽孢桿菌的發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：將枯草芽孢桿菌M252純化后接入一級(jí)種子罐中，一級(jí)種子罐中的培養(yǎng)基的配方為：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化鈉1g/L、用凈化的海水配制，35℃、200rpm培養(yǎng)40h，得一級(jí)種子液；
步驟2：將一級(jí)種子液接入二級(jí)種子罐中，二級(jí)種子罐中的培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖40g/L、酵母膏10g/L、玉米漿5g/L、硫酸銨1g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀1.5g/L、氯化鈣1g/L、用凈化的海水配制，35℃、300rpm培養(yǎng)20h，得二級(jí)種子液；
步驟3：將二級(jí)種子液接入液體發(fā)酵罐中，液體發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基的配方為：氯化銨1g/L、醋酸鈉3g/L、氯化鎂0.2g/L、氯化鈣0.2g/L、磷酸二氫鉀0.6g/L、氯化鈉1g/L、酵母膏2g/L、葡萄糖2g/L、用凈化的海水配制，設(shè)置溫度35℃、轉(zhuǎn)速400rpm、通風(fēng)量0.75vvm、DO值25%，控制發(fā)酵液pH 7-8，手動(dòng)添加消泡劑，發(fā)酵56h，得發(fā)酵液，將發(fā)酵液于4℃、4000rpm離心，將所得上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮10倍，濃縮液通過 0.22μm 濾膜除去菌體及沉淀物，得抗菌肽液劑；
或者，將二級(jí)種子液接入固體發(fā)酵罐中，固體發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基的配方為：氯化鈉5g/kg、磷酸二氫鉀2g/kg、硫酸銨2g/kg、余量為麩皮、米糠或豆粕、含水量控制在20-40%，控制濕度30%，35℃、8rpm培養(yǎng)56h，然后低溫鼓風(fēng)干燥，得抗菌肽固劑，之后向抗菌肽固劑中按重量比10：1加入無菌凈化水，180rpm浸提2h，浸提液離心濃縮、0.22μm濾膜除菌，得抗菌肽液劑。
5.采用權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法發(fā)酵得到的抗菌肽液劑的應(yīng)用，其特征在于，作為對(duì)蝦、水產(chǎn)魚類養(yǎng)殖的功能肥料使用，直接投施至養(yǎng)殖池塘中。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;中科海洋微生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院（山東）有限公司，未經(jīng)中國科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;中科海洋微生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院（山東）有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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