[發明專利]一株產抗菌肽的海洋芽孢桿菌及其發酵方法和應用

有效

• 申請號: 202010824328.0
• 申請日: 2020-08-17
• 公開（公告）號: CN111733117B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 彭健;方素云;胡曉珂;閔軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所;中科海洋微生物產業技術研究院（山東）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;C05F11/08;A23K20/195;A23K20/147;A23K50/80;A23K50/75;C02F1/50;C12R1/125
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 潘劍敏

本發明公開了一株產抗菌肽的海洋芽孢桿菌及其發酵方法和應用，該海洋芽孢桿菌是從采自于威海市南海新區某養殖池的底泥樣品中分離、純化得到的枯草芽孢桿菌M252，其對溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌均具有明顯的抑制效果，保藏編號為CCTCC NO：M 2020057，該枯草芽孢桿菌M252通過液體發酵和固體發酵可以制備得到固液粉三種不同使用狀態的抗菌肽制品，發酵制品多元化，可應用至水產養殖、動物飼料、作物肥料等不同領域，另外，該枯草芽孢桿菌M252在發酵過程中所用到的培養基成分均來源于成本較低的原料，在保證了發酵效率的同時降低了發酵成本，更適應于工業化生產應用。

技術領域

本發明涉及一株菌株及其發酵方法和應用，具體涉及一株產抗菌肽的海洋芽孢桿菌及其發酵方法和應用，屬于微生物技術領域。

背景技術

在抗擊致病菌的戰爭中，抗生素一直是人類所掌握的最重要的武器。但隨著抗生素在醫療、飼料添加劑等方面的大量使用，使得許多致病菌進化出多種機制得以在諸多抗生素中存活，抗生素耐藥性也成為當今社會面臨的最嚴峻挑戰之一。耐藥性和藥物殘留問題日益嚴重，影響著人類健康。因此，尋找抗生素的替代物十分緊迫。

篩選可以有效抵抗病原體的化學物質一直是生命科學領域研究的熱點。抗菌肽又叫宿主防御肽，通常是由7-100個氨基酸組成的小分子多肽，是生物體天然免疫防御系統的重要組成部分，也是各種生物抵御入侵病原體的第一道防線，作為一種可從自然來源中提取并用于對抗抗生素耐藥細菌的潛在候選物，已引起了廣泛關注。抗菌肽具有廣譜抗細菌、抗病毒、抗真菌、抗原蟲、甚至抗腫瘤細胞等活性，另外抗菌肽還表現出了促進機體組織愈合及調節體內免疫系統等活性。

以枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）等為代表的大多數芽孢桿菌生長迅速、營養要求簡單、抗逆性強，均可產生多肽類抗菌素以及具有溶菌作用的酶類。作為自然界中廣泛存在的非致病菌，絕大多數芽孢桿菌對人畜無害且不會造成環境污染。因此，芽孢桿菌及其抗菌肽等代謝產物是控制病原菌病害最為安全有效和最具應用前景的天然生物制劑。

在現有技術中，通過陸源芽孢桿菌產抗菌肽的應用較為普遍。綜合考慮生產成本與作用效果，將產抗菌肽微生物及其代謝產物直接固載制成微生物菌劑的應用越來越多。在海洋水產品養殖中應用各種抗菌肽，可以提高水產動物的生產性能、消化酶活性、抗氧化和免疫功能，但在應用微生物菌劑時則需考慮海水環境的特殊性。所以，選育一株產抗菌肽的海洋微生物，通過發酵獲得抗菌肽或制備微生物菌劑并進行應用，研究開發安全無毒、無耐藥性、高效的飼用抗生素替代品，是水產養殖和畜牧養殖飼料生產的關鍵環節，更是控制食品質量安全的源頭。

發明內容

本發明的目的在于：考慮在海洋水產品養殖中海水環境的特殊性，篩選一株產抗菌肽的海洋微生物，并提供該產抗菌肽的海洋微生物的發酵方法，同時提供一種針對由上述產抗菌肽的海洋微生物發酵制成的微生物菌劑的應用方法。

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：

一株產抗菌肽的海洋芽孢桿菌，其特征在于，該海洋芽孢桿菌是從采自于威海市南海新區某養殖池的底泥樣品中分離、純化得到的枯草芽孢桿菌M252，其對溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌和大腸桿菌均具有明顯的抑制效果，保藏編號為CCTCC NO：M2020057，保藏日期為2020 年03月24日，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢。

前述的產抗菌肽的海洋芽孢桿菌的第一種發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：將枯草芽孢桿菌M252純化后接入一級種子罐中，一級種子罐中的培養基的配方為：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化鈉1g/L、用凈化的海水配制，35℃、200rpm培養40h，得一級種子液；