[發明專利]一種撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法

在審

• 申請號: 202010822554.5
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111925947A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 四川金珠生態農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 王偉

1.一種撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，包括：

斜面種子培養，在無菌條件下將撕裂蠟孔菌菌株涂布接種于斜面培養基上，得斜面菌絲；

搖瓶種子培養，在無菌條件下，挖取生長成熟的斜面菌絲，接種于搖瓶培養基中，再置于恒溫培養振蕩器上，振蕩頻率為200-260rpm，培養溫度為22-30℃，培養48-90小時后得搖瓶種子液；

種子罐培養，將搖瓶種子液種入種子罐培養基中，得種子罐種子液；

發酵罐培養，將種子罐種子液壓入發酵罐培養基中，得發酵罐菌絲體；

發酵液預處理，待發酵罐菌絲體發酵完畢后，對發酵罐內的發酵液進行預處理，以促進撕裂蠟孔菌被囊孢子的釋放，得預處理發酵液；

密閉封存，將預處理發酵液進行分裝密封存放4個月以上后得到撕裂蠟孔菌孢子液。

2.根據權利要求1所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，斜面種子培養步驟中，培養溫度為22-30℃，培養時間為7-10天；

種子罐培養步驟中，振蕩頻率為120-200rpm，通氣量為1:0.8-2.0vvm，罐壓0.05MPa，培養溫度為22-30℃，培養時間為60-90小時；

發酵罐培養步驟中，振蕩頻率為60-140rpm，通氣量為1:0.2-0.8vvm，罐壓0.05MPa，培養溫度為22-30℃，培養時間為110-170小時。

3.根據權利要求1所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，斜面種子培養步驟中，斜面培養基通過以下步驟制得：

將200g馬鈴薯洗凈切片后用水煮沸30分鐘，過濾后取濾液待用；

將20g葡萄糖和20g瓊脂粉同時溶于上述濾液中加熱攪拌；

待瓊脂粉充分膨化溶解后再用水定容至1000ml，自然pH；

將定容后的1000ml溶液分裝于若干支試管中，每支試管裝量10ml-15ml，塞住各個試管的開口后進行滅菌處理，滅菌完畢后，得到所述斜面培養基。

4.根據權利要求1所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，搖瓶種子培養步驟中，搖瓶培養基通過以下步驟制得：

將200g馬鈴薯洗凈切片后用水煮沸30分鐘，過濾后取濾液待用；

將20g葡萄糖溶于上述濾液中加熱攪拌；

待葡萄糖溶解后再用水定容至1000ml，自然pH；

將定容后的1000ml溶液分裝于若干三角瓶中，每瓶裝量100-150ml，塞住各個三角瓶的開口后進行滅菌處理，滅菌完畢后得到所述搖瓶培養基。

5.根據權利要求1所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，種子罐培養步驟中，種子罐培養基通過以下步驟制得：

將6kg葡萄糖、12kg馬鈴薯、9kg黃豆粉和100L水置于種子罐中，攪拌至物料充分混勻后用水定容至250L；

加入0.12L泡敵后密封灌口，然后進行滅菌處理，滅菌完畢后得到所述種子罐培養基。

6.根據權利要求1所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，發酵罐培養步驟中，發酵罐培養基通過以下步驟制得：

將240kg葡萄糖、180kg黃豆粉、1.5kg磷酸氫二鉀、7.2kg磷酸二氫鉀、3.0kg硫酸鎂、0.012kg生物素、0.012kg泛酸鈣、0.024kg氯化鈷置于配料池中，加入適量水攪拌均勻；

將上述混合均勻的物料送入發酵罐中，同時投入240kg馬鈴薯至發酵罐中，用水定容至10500L，自然pH；

加入3.6L泡敵后密封灌口，然后進行滅菌處理，滅菌完畢后制得發酵罐培養基。

7.根據權利要求6所述的撕裂蠟孔菌孢子液的制備方法，其特征在于，將配料池中的物料混合均勻后，啟動料泵將物料泵入12000L發酵罐中，分三次注入適量水沖洗配料池直至干凈，沖洗液全部泵入發酵罐，同時將240kg馬鈴薯直接投入發酵罐中，用水定容至10500L，加入3.6L泡敵后密閉罐口，用飽和蒸汽滅菌30min，溫度120～124℃；控制消后體積為12000L，制得發酵罐培養基。