[發明專利]一種組織切片獲取帶有精準空間定位單細胞的方法

有效

• 申請號: 202010822495.1
• 申請日: 2020-08-13
• 公開（公告）號: CN114076700B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 張智紅;黃松林;潘奇;林棟;駱清銘
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

本發明提供了一種組織切片獲取帶有精準空間定位單細胞的方法，屬于生物技術領域，包括：在組織切片的一面粘附透明膠帶，組織切片經固定處理后，用另一層透明膠帶覆蓋組織切片的另一面，形成三層結構，然后用刻有方格矩陣的芯片在膠帶上印上印記；將所述三層結構進行顯微成像，獲取細胞空間構架圖；沿數個方向拉伸三層結構，拉伸后進行顯微成像，獲取拉伸后的細胞空間構架圖；撕掉上層覆蓋的透明膠帶，從附帶組織切片的透明膠帶上獲取單個目標細胞。該方法能夠在獲取完整單個細胞的同時，保留目標細胞的精準空間信息，適用動物組織目標細胞功能狀態與細胞定位關系的研究。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種從動物組織冰凍切片上捕獲完整單個目標細胞并保留其精準空間定位的方法。

背景技術

生物組織是由不同類型的細胞組成的復雜系統，通常在高度結構化的重復解剖單元中相互作用。單細胞分析能準確反映細胞的異質性，深入理解其基因型與表型之間的相互關系；然而，理解器官功能、發育和疾病需要將單細胞功能狀態與其空間定位聯系起來。

目前獲取單個細胞的方法主要有激光顯微切割法、微流控分選法、流式分選法、顯微吸取法等。微流控分選、流式分選和顯微吸取法均能獲取完整單個細胞，但會喪失目標細胞的空間定位信息；激光顯微切割法雖然可以在切片原位獲取細胞，但不能獲取完整單個細胞，因而不能排除相鄰細胞的污染，導致后續實驗結果的誤差，此外，激光的高能量也會對細胞內組份造成損傷，且儀器和耗材價格昂貴。因此，開發一種既能獲取完整單個細胞，又能保留目標細胞空間信息的廉價簡便方法顯得尤為重要。

發明內容

為了解決獲取完整單細胞困難且無法空間定位的技術問題，本發明提供了一種組織切片獲取帶有精準空間定位單細胞的方法，該方法能夠在獲取完整單個細胞的同時，保留目標細胞的精準空間信息，適用動物組織目標細胞功能狀態與細胞定位關系的研究。

本發明通過以下技術方案實現：

一種組織切片獲取帶有精準空間定位單細胞的方法，包括：

在組織切片的一面粘附透明膠帶，組織切片經固定處理后，用另一層透明膠帶覆蓋組織切片的另一面，形成三層結構，然后用刻有方格矩陣的芯片在膠帶上印上印記；

將所述三層結構進行顯微成像，獲取細胞空間構架圖；

沿數個方向拉伸三層結構，拉伸后進行顯微成像，獲取拉伸后的細胞空間構架圖；

撕掉上層覆蓋的透明膠帶，從附帶組織切片的透明膠帶上獲取單個目標細胞，依據拉伸前后的細胞空間構架圖，準確獲取所述單個目標細胞的空間定位信息。

其中，所述組織切片通過動物組織脫水后冷凍固定，然后冰凍切片制得，所述組織切片厚度為3～20μm。

本發明中，根據不同細胞的直徑調節組織切片厚度，以控制組織切片中完整細胞的層數為1層為宜。

進一步的，所述透明膠帶采用單面帶粘附性可拉伸膠帶，具體為：以聚乙烯(PE)薄膜為基礎材料，以交聯型丙烯酸樹脂作為交聯劑。

進一步的，所述固定處理為：

向透明膠帶上的組織切片添加固定液，使組織切片完全被固定液浸潤，固定結束后用PBS緩沖液洗去組織切片表面固定液。

進一步的，所述固定液的制備方法為：將Lomant試劑(即N-羥基琥珀酰亞胺酯)溶解于DMSO中獲得交聯劑溶液，然后將交聯劑溶液與無水乙醇、PBS緩沖液混合得到固定液；固定液中Lomant試劑的濃度為1～5mg/ml，DMSO體積占比30～60％，無水乙醇體積占比10～50％，PBS緩沖液體積占比30～50％，固定液滴加過程在-30～0℃下進行，完全浸潤組織切片后置于10～35℃下固定5～10min，所述PBS緩沖液采用PBS，pH＝6～8。