[發(fā)明專利]一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010822495.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN114076700B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張智紅;黃松林;潘奇;林棟;駱清銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28
• 代理公司: 北京眾達(dá)德權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

1.一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，包括：

在組織切片的一面粘附透明膠帶，組織切片經(jīng)固定處理后，用另一層透明膠帶覆蓋組織切片的另一面，形成三層結(jié)構(gòu)，然后用刻有方格矩陣的芯片在膠帶上印上印記；

將所述三層結(jié)構(gòu)進(jìn)行顯微成像，獲取細(xì)胞空間構(gòu)架圖；

沿?cái)?shù)個(gè)方向拉伸三層結(jié)構(gòu)，拉伸后進(jìn)行顯微成像，獲取拉伸后的細(xì)胞空間構(gòu)架圖；

撕掉上層覆蓋的透明膠帶，從附帶組織切片的透明膠帶上獲取單個(gè)目標(biāo)細(xì)胞，依據(jù)拉伸前后的細(xì)胞空間構(gòu)架圖，準(zhǔn)確獲取所述單個(gè)目標(biāo)細(xì)胞的空間定位信息；

所述固定處理為：向透明膠帶上的組織切片添加固定液，使組織切片完全被固定液浸潤，固定結(jié)束后用PBS緩沖液洗去組織切片表面固定液，所述固定液的制備方法為：將Lomant試劑溶解于DMSO中獲得交聯(lián)劑溶液，然后將交聯(lián)劑溶液與無水乙醇、PBS緩沖液混合得到固定液；固定液中Lomant試劑的濃度為1～5?mg/ml，DMSO體積占比60%，無水乙醇體積占比10%，PBS緩沖液體積占比30%，固定液滴加過程在-30～0℃下進(jìn)行，完全浸潤組織切片后置于10～35℃下固定5～10?min，所述PBS緩沖液采用PBS，pH=6～8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述組織切片通過動(dòng)物組織脫水后冷凍固定，然后冰凍切片制得，所述組織切片厚度為3～20μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述透明膠帶采用單面帶粘附性可拉伸膠帶。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述三層結(jié)構(gòu)拉伸后面積擴(kuò)大20～200%，三層結(jié)構(gòu)的拉伸采用手動(dòng)拉伸或機(jī)械裝置拉伸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，撕掉上層透明膠帶后，將附帶組織切片的透明膠帶置于顯微操作系統(tǒng)上，獲取單個(gè)目標(biāo)細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述顯微成像采用：倒置顯微鏡或共聚焦顯微鏡或?qū)拡鲲@微鏡，所述顯微操作系統(tǒng)包括倒置顯微鏡、CCD鏡頭和顯微操作儀。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述動(dòng)物組織采用新鮮動(dòng)物組織。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織切片獲取帶有精準(zhǔn)空間定位單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述三層結(jié)構(gòu)的拉伸方向?yàn)閮蓚€(gè)以上。