[發(fā)明專利]高密度脂蛋白3膽固醇的定量方法、測(cè)定試劑及制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010820946.8
• 申請(qǐng)日: 2020-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN111926057A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王學(xué)忠;萬蒙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西樂成生物醫(yī)療有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/60
• 分類號(hào): C12Q1/60;C12Q1/44;C12Q1/26;C12Q1/30;C12Q1/28
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 何世磊

本發(fā)明公開了一種高密度脂蛋白3膽固醇的定量方法，包括以下步驟：(1)將試樣與含有第一表面活性劑、脂蛋白膽固醇遮蔽劑和二價(jià)金屬離子的第一試劑混合反應(yīng)，得第一反應(yīng)液，以及遮蔽全部脂蛋白膽固醇；(2)將第一反應(yīng)液與含有第二表面活性劑的第二試劑混合反應(yīng)，得第二反應(yīng)液；(3)讀取第二反應(yīng)液在色原化合物相應(yīng)波長(zhǎng)處的吸光度值，計(jì)算高密度脂蛋白3膽固醇的含量。利用表面活性劑、脂蛋白膽固醇遮蔽劑和二價(jià)金屬離子清除高密度脂蛋白3膽固醇以外的脂蛋白膽固醇和遮蔽全部的脂蛋白膽固醇，能大大提高測(cè)量精度。本發(fā)明還公開了一種采用上述方法的測(cè)定試劑以及該測(cè)定試劑的制備方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生化檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種高密度脂蛋白3膽固醇的測(cè)定試劑及制備方法。

背景技術(shù)

高密度脂蛋白(HDL)是血液中脂蛋白的組成成分之一，一般將HDL亞組分中顆粒較小密度較大的HDL稱為高密度脂蛋白3(HDL3)，HDL3中的膽固醇(HDL3-C)是檢測(cè)心血管疾病的重要指標(biāo)。

目前在臨床檢測(cè)應(yīng)用中，測(cè)定HDL3的方法有電泳法、超速離心法和分級(jí)沉淀法等，均具有較高的精度，企業(yè)或醫(yī)院采用對(duì)應(yīng)的方法需采購(gòu)對(duì)應(yīng)的儀器設(shè)備，并配備相關(guān)的技術(shù)人員。

現(xiàn)有的檢測(cè)方法需采用昂貴的儀器設(shè)備和專門的技術(shù)人員，操作步驟繁瑣，一般需要長(zhǎng)達(dá)十幾個(gè)小時(shí)，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，難以應(yīng)用于快速臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種能夠快速檢測(cè)的高密度脂蛋白3膽固醇的測(cè)定試劑。

一種高密度脂蛋白3膽固醇的定量方法，用于非疾病的診斷和治療目的，包括以下步驟：

(1)將試樣與含有第一表面活性劑、脂蛋白膽固醇遮蔽劑和二價(jià)金屬離子的第一試劑混合反應(yīng)，得第一反應(yīng)液，所述第一試劑用于清除所述試樣中高密度脂蛋白3膽固醇以外的脂蛋白膽固醇，以及遮蔽全部脂蛋白膽固醇；

(2)將第一反應(yīng)液與含有第二表面活性劑的第二試劑混合反應(yīng)，得第二反應(yīng)液；

(3)讀取第二反應(yīng)液在546nm和660nm波長(zhǎng)處的吸光度值，計(jì)算高密度脂蛋白3膽固醇的含量。

本發(fā)明的有益效果在于：利用表面活性劑、脂蛋白膽固醇遮蔽劑和二價(jià)金屬離子能清除高密度脂蛋白3膽固醇以外的脂蛋白膽固醇和遮蔽全部的脂蛋白膽固醇，能大大提高測(cè)量精度。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提出一種高密度脂蛋白3膽固醇的測(cè)定試劑，包括以下組分：

第一試劑，包括色原化合物、二價(jià)金屬離子、第一表面活性劑、遮蔽劑、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過氧化氫酶、第一緩沖液、第一防腐劑和第一穩(wěn)定劑；

第二試劑，包括第二緩沖液、過氧化物酶、4-氨基安替比林、第二穩(wěn)定劑、第二防腐劑和第二表面活性劑。

在本發(fā)明中，將膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和過氧化氫酶組合使用，再配合過氧化物酶和4-氨基安替比林能實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，同時(shí)能確保檢測(cè)的精度。

另外，根據(jù)本發(fā)明提供的高密度脂蛋白3膽固醇的測(cè)定試劑，還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

進(jìn)一步地，所述第一緩沖液和所述第二緩沖液均為MOPS緩沖液或MOPSO緩沖液。

進(jìn)一步地，所述第一穩(wěn)定劑為抗壞血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化鈉、EDTA中的一種或多種，所述第一防腐劑為Proclin-300，所述第二防腐劑為疊氮鈉。