[發明專利]高密度脂蛋白3膽固醇的定量方法、測定試劑及制備方法

在審

• 申請號: 202010820946.8
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111926057A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王學忠;萬蒙
• 申請（專利權）人: 江西樂成生物醫療有限公司
• 主分類號: C12Q1/60
• 分類號: C12Q1/60;C12Q1/44;C12Q1/26;C12Q1/30;C12Q1/28
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 何世磊

1.一種高密度脂蛋白3膽固醇的定量方法，用于非疾病的診斷和治療目的，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將試樣與含有第一表面活性劑、脂蛋白膽固醇遮蔽劑和二價金屬離子的第一試劑混合反應，得第一反應液，所述第一試劑用于清除所述試樣中高密度脂蛋白3膽固醇以外的脂蛋白膽固醇，以及遮蔽全部脂蛋白膽固醇；

(2)將第一反應液與含有第二表面活性劑的第二試劑混合反應，得第二反應液；

(3)讀取第二反應液在色原化合物相應波長處的吸光度值，計算高密度脂蛋白3膽固醇的含量。

2.一種高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，應用于權利要求1的定量方法，其特征在于，包括以下組分：

第一試劑，包括色原化合物、二價金屬離子、第一表面活性劑、遮蔽劑、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過氧化氫酶、第一緩沖液、第一防腐劑和第一穩定劑；

第二試劑，包括第二緩沖液、過氧化物酶、4-氨基安替比林、第二穩定劑、第二防腐劑和第二表面活性劑。

3.根據權利要求2所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，其特征在于，所述第一緩沖液和所述第二緩沖液均為MOPS緩沖液或MOPSO緩沖液。

4.根據權利要求2所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，其特征在于，所述第一穩定劑為抗壞血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化鈉、EDTA中的一種或多種，所述第一防腐劑為Proclin-300，所述第二防腐劑為疊氮鈉。

5.根據權利要求4所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，其特征在于，所述第一穩定劑由牛血清蛋白、氯化鈉和EDTA組成，含量分別為2～5g/L、25～55mmol/L和0.1～2mmol/L，所述第二穩定劑為牛血清蛋白，含量為0.2～5g/L，所述遮蔽劑包括硫酸葡聚糖、肝素和聚乙二醇，含量分別為0.5％～1.0％、300U/L～2000U/L和0.5％～3.0％，所述第一防腐劑和所述第二防腐劑的濃度分別為0.01～0.5％和0.1～0.3％。

6.根據權利要求5所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，其特征在于，所述遮蔽劑還包括皂素，濃度為0.1g/L～2g/L。

7.根據權利要求2所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑，其特征在于，所述二價金屬離子的濃度為2～20mmol/L，所述第一表面活性劑的濃度為0.1％～0.5％，所述膽固醇酯酶的含量為0.5～5KU/L，所述膽固醇氧化酶的含量為1～3.5KU/L，所述過氧化氫酶的含量為1～10MU/L，所述第一緩沖液的濃度為35～50mmol/L，所述過氧化物酶的含量為2～10KU/L，所述4-氨基安替比林的濃度為0.4～40mmol/L。

8.根據權利要求2～7任意一項所述的高密度脂蛋白3膽固醇的測定試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將所述色原化合物、二價金屬離子、第一表面活性劑、遮蔽劑、第一緩沖液、第一防腐劑和第一穩定劑混合攪拌，調節pH至6.0～7.5，再加入所述膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過氧化氫酶，得所述第一試劑；

(2)將所述第二緩沖液、4-氨基安替比林、第二穩定劑、第二防腐劑和第二表面活性劑混合攪拌，調節pH至6.0～7.5，再加入所述過氧化物酶，得所述第二試劑。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中混合攪拌的步驟包括：

先將所述色原化合物、二價金屬離子、第一表面活性劑混合攪拌，得第一混合液；

再將所述遮蔽劑、第一緩沖液、第一防腐劑混合攪拌，得第二混合液；

將所述第二混合液滴入所述第一混合液中，攪拌均勻，使溫度保持在20～30℃以下，再加入所述第一穩定劑攪拌均勻。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中混合攪拌的步驟包括：

將所述第二緩沖液、第二表面活性劑和4-氨基安替比林混合，加水溶解得第三混合液；

將所述第二穩定劑和第二防腐劑加入所述第三混合液中，攪拌溶解保持在30℃下靜置1～2h。