[發明專利]一種高產有機硒的微生物及其用于制備有機硒的應用

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• 申請號: 202010820184.1
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112080443A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 焦強
• 申請（專利權）人: 北京岳泰華生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P9/00;A61K31/095;A61P35/00;A61P31/18;C12R1/07
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 尹瑋

1.一種YTH芽孢桿菌，其特征在于，其分類命名為芽孢桿菌屬Bacillus.sp，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.20180。

2.一種有機硒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求1所述的YTH芽孢桿菌進行種子培養，將活菌數為1.0-2.0x10⁸個/ml的YTH芽孢桿菌種子培養液按照0.2-5％的接種量接種至每100ml培養基中含有1-2％的魚蛋白胨和0.1-0.2％K₂HPO₄的起始培養基中，于30-40℃，100-300rpm，培養12-24h后，加入濃度為1-20％的亞硒酸鈉水溶液以及與亞硒酸鈉水溶液等體積的液體培養基，其中起始培養基與亞硒酸鈉水溶液的體積比為2:1，于30-40℃，100-300rpm，反應12-200h后，制得含有機硒的發酵液。

3.一種有機硒，由權利要求2所述的方法制得。

4.一種藥物組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)將活菌數為1.0-2.0x10⁸個/ml的YTH芽孢桿菌種子培養液按照0.2-5％的接種量接種至每100ml培養基中含有1-2％的魚蛋白胨和0.1-0.2％K₂HPO₄的起始培養基中，于30-40℃，100-300rpm，培養12-24h后，加入濃度為1-20％的亞硒酸鈉水溶液以及與亞硒酸鈉水溶液等體積的液體培養基，其中，起始培養基：亞硒酸鈉水溶液的體積比為2:1，于30-40℃，100-300rpm，反應12-200h后，制得含有機硒的發酵液；(2)將含有機硒的發酵液和含活菌數為1.0-2.0x10⁸個/ml的YTH芽孢桿菌種子培養液混合，于30-40℃，反應12-24h后，即得藥物組合物；其中，YTH芽孢桿菌種子培養液接種到含有機硒的發酵液中的接種量為1-5％，優選為2-3％；優選的，以Se元素計，所述藥物組合物中的有機硒的含量為100-400ug/ml，優選為200-300ug/ml，更優選為260-270ug/ml。

5.一種藥物組合物，由權利要求4所述的方法制得。

6.一種有機硒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將權利要求1所述的YTH芽孢桿菌進行種子培養，離心收集活菌數為1.0-2.0x10⁸個/ml的YTH芽孢桿菌種子培養液中的菌體，將收集菌體按照每g菌體與20ml的pH 8.0-9.0的磷酸鹽緩沖溶液混合，攪拌混勻，超聲破碎后，離心，取上清液，在制得的上清液中加入等體積的濃度為1-20％的亞硒酸鈉底物溶液，于30-40℃，100-300rpm，反應12-200h后，制得含有機硒的發酵液；優選的，以硒元素計，所述含有機硒的發酵液中的有機硒含量10-40mg/mL，優選為15-30mg/mL。

7.一種有機硒，由權利要求6所述方法制得。

8.一種藥物組合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)離心收集活菌數為1.0-2.0x10⁸個/ml的YTH芽孢桿菌種子培養液中的菌體，將收集菌體按照每g菌體與20ml的pH 8.0-9.0的磷酸鹽緩沖溶液混合，攪拌混勻，超聲破碎后，離心，取上清液，在制得的上清液中加入等體積的濃度為1-20％的亞硒酸鈉底物溶液，于30-40℃，100-300rpm，反應12-200h后，制得含有機硒的發酵液；(2)向步驟(1)制得的含有機硒的發酵液中再加入1-5％步驟(1)制得的上清液，于30-40℃，反應12-24h后，即得，其中優選上清液接種到含有機硒的發酵液中的接種量為2-3％；優選的，所述的藥物組合物中以Se元素計有機硒的含量為100-400ug/ml，優選為200-300ug/ml，優選為260-270ug/ml。

9.一種藥物組合物，由權利要求8所述方法制得。

10.權利要求3或7所述的有機硒或權利要求5或9所述的藥物組合物的任一種用于制備治療癌癥藥物或艾滋病的任一種病癥或其并發癥的藥物中的應用，優選癌癥選自肝癌、食道癌、胃癌、胰腺瘤、膽管細胞癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結腸癌、下咽癌、皮膚基底細胞癌、左乳癌、宮頸癌、上頜腫瘤、鼻咽癌的任一種或其并發癥。