[發明專利]利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝

有效

• 申請號: 202010819134.1
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111925946B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 陳學政;韓卓濤;盧悅;向文良
• 申請（專利權）人: 山東格潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

本發明涉及利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝，包括將茶藨子葉狀層菌菌粉接種于含有固體培養基的無菌平板上分離純化，挑取單個菌落接種于含有麥麩汁的液體培養基中培養，再在液體培養基中擴大培養后接種于5L發酵罐中進行發酵生產。本發明提出茶藨子葉狀層菌的連續流加液體深層發酵生產工藝，提高了茶藨子葉狀層菌的產量，也提高了茶藨子葉狀層菌中麥角甾醇等活性物質的含量，對提高茶藨子葉狀層菌的產量和品質具有重要意義。

技術領域

本發明屬于微生物工程技術領域，特別涉及利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝。藨子葉狀層菌又名金銀花菌，英文名為：Phylloporia fibis(Schumanch.:Fr.)Ryvarden。

背景技術

茶藨子葉狀層菌(Phylloporia ribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden)，又名金銀花菌，為寄生在忍冬科植物忍冬植株上的一種大型真菌。該菌主產于山東平邑，俗稱“銀花蛾子”，在當地用藥歷史悠久。該菌經過了長期的民間應用，發現其具有清熱、止痛、解毒的功效，常被用來治療咽喉炎和各種癌癥。茶藨子葉狀層菌中含有三萜類、多糖類、甾醇類、脂肪酸類等多種活性成分，具有消炎、增強免疫力和抗癌的作用，是與金銀花作用相似的珍貴真菌藥物資源。

近年來經過對茶藨子葉狀層菌的開發利用，市場需要量非常大，人工培養的技術也得到了迅速發展。但固體培養子實體生長緩慢，難以大批量生產，本發明采用液體深層發酵技術批量生產茶藨子葉狀層菌，到目前為止，食藥用菌的液體深層發酵技術發展非常迅速，利用液體深層發酵技術生產食藥用菌菌絲體，提取其中有效成分應用于醫藥工業取得了很大的發展。本發明生產茶藨子葉狀層菌不僅可以提高產菌量，其中的活性成分含量也得到了大幅度提高，有利于該菌的大規模生產和開發利用。

發明內容

為了克服背景技術中固體培養子實體生長緩慢，難以大批量生產等問題，本發明提出茶藨子葉狀層菌的連續流加液體深層發酵生產工藝，提高了茶藨子葉狀層菌的產量，也提高了茶藨子葉狀層菌中麥角甾醇等活性物質的含量，對提高茶藨子葉狀層菌的產量和品質具有重要意義。

為了實現上述目的，本發明是按照以下方式實現的：

利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝，包括菌粉劃平板分離純化-液體培養基培養-種子擴大培養-發酵罐發酵生產-菌絲體收集、干燥、活性成分檢測和真空包裝。

液體發酵培養基由以下物質按重量百分含量配制：蛋白胨2％，無水葡萄糖2.5％，KH₂PO₄0.05％,MgSO₄·7H₂O 0.025％，麥麩汁的體積百分含量為12.5％，余量為蒸餾水。培養基在121℃下進行高壓滅菌20min。

用接種環無菌操作將少量菌粉接種于含有固體培養基無菌平板上，固體培養基格外添加2％的瓊脂。發酵罐培養條件：裝樣量80％，通氣量為1vvm，初始攪拌速度為100rpm，維持pH為6.0，溫度29℃，培養12h時，提高轉速至200rpm并培養至14h，再提高轉速至400rpm，培養至36h時通過蠕動泵進行補料；培養48h時將轉速提高至800rpm，直至培養96h發酵結束。其中每隔12h取樣1次，每次取2份，每份25mL，進行發酵液中生物量和葡萄糖含量的檢測。中途補料成分為600mL麥麩汁中加入120g無水葡萄糖和96g蛋白胨，在121℃下進行高壓滅菌20min，于超凈工作臺中冷卻至室溫后倒入發酵罐的補料瓶中，通過蠕動泵以0.25mL/min的速度進行補料。

發酵結束時通過收集到的干菌量反映最終生物量可達25.45g/L。

本發明方法對發酵生產的茶藨子葉狀層菌菌絲體中麥角甾醇含量通過高效液相進行了檢測，含量為3.073±0.009mg/g。

本發明的有益效果：

1.調整攪拌轉速對發酵生產的影響