[發明專利]利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝

有效

• 申請號: 202010819134.1
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111925946B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 陳學政;韓卓濤;盧悅;向文良
• 申請（專利權）人: 山東格潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P33/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

1.利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1.培養基的配制和滅菌

配制好的液體培養基中，各物質的重量百分含量是：蛋白胨2％，無水葡萄糖2.5％，KH₂PO₄0.05％,MgSO₄·7H₂O 0.025％，麥麩汁的體積百分含量是12.5％，余量為蒸餾水，將制備好的液體培養基在121℃下進行高壓滅菌20min；

步驟2.菌粉活化和擴大培養

用接種環無菌操作將少量菌粉接種于含有固體培養基無菌平板上，經分離純化后挑取單個菌落接種于50mL液體培養基中，在避光、29℃、150rpm條件下培養3d，然后將50mL液體無菌操作整體接種于400mL液體培養基中，在避光、29℃、150rpm條件下培養3d；

步驟3.發酵罐發酵培養：

發酵罐裝樣量80％，確保發酵罐完全密封后，將整個發酵罐置于滅菌鍋內于121℃下進行高壓滅菌20min，待滅菌結束冷卻至室溫后將其從滅菌鍋中取出連接上發酵罐配套的控制系統；調整通氣量為1vvm，初始攪拌轉速為100rpm,維持pH為6.0-6.5，溫度29℃-30℃；

將步驟2中400mL種子菌液以火焰接種法通過接菌口接種于發酵罐的培養基中進行發酵培養，將攪拌轉速與溶氧值聯合，按照溶氧值降至10％以下時將轉速提高1倍調整攪拌轉速，每隔12h取樣1次，每次取樣時取2份，2份的平均值作為最終結果，各取20-25mL，通過干重法測得發酵液中生物量，通過DNS法測定發酵液中葡萄糖含量，當發酵液中葡萄糖含量低于5g/L時，開始補料，補料液為一定濃度的麥麩汁、無水葡萄糖和蛋白胨的混合液體，中途補料成分為600mL麥麩汁中加入120g無水葡萄糖和96g蛋白胨，體積維持在500-700mL，無水葡萄糖和蛋白胨的比例維持在5:2至5:4，補料液混勻后在121℃下進行高壓滅菌20min，冷卻至室溫后于超凈工作臺中倒入發酵罐的補料瓶中，通過蠕動泵泵入發酵罐中，補料速度維持在0.25-0.75mL/min，待補料結束，發酵液中葡萄糖含量降低至3g/L及以下時，結束發酵；

步驟4.收集菌絲

發酵結束后發酵液用500目濾布過濾收集菌絲體，用3倍發酵液體積的蒸餾水混勻清洗后再次用500目濾布過濾，以除去菌絲體中殘留的發酵液中的雜質成分，收集到的菌絲體在-50℃下冰凍24h后置于真空冷凍干燥機內干燥處理24h除去水分；

步驟5.菌絲制品

將干燥處理后的菌絲體用小型打粉機粉碎2min制成菌粉，取一小部分菌粉用來檢測其中蛋白質、多糖含量以及麥角甾醇、總三萜活性物質的含量，其余菌粉用真空密封袋抽真空制成產品。

2.根據權利要求1所述的利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝，其特征在于，步驟1中麥麩汁是按照每升蒸餾水中加入160g麥麩煮30min，過濾、離心后取上清液所得。

3.根據權利要求1所述的利用連續流加液體深層發酵生產茶藨子葉狀層菌的工藝，其特征在于，步驟2中，固體培養基格外添加2％的瓊脂。