[發(fā)明專利]一種分泌雙特異性抗體的免疫細(xì)胞及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010816593.4
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN111944760A
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬麗雅;薛衛(wèi)巍;謝海濤
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東先康達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/078;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 深圳灼華創(chuàng)睿專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44524
• 代理人: 佟巍巍

本發(fā)明涉及生物細(xì)胞技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種分泌雙特異性抗體的免疫細(xì)胞及其應(yīng)用，分泌雙特異性抗體的免疫細(xì)胞包括免疫細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體，并且表達(dá)分泌型的雙特異性抗體。通過分泌的雙特異性抗體，阻斷PD?1、CTLA?4兩條負(fù)反饋途徑，從而減弱腫瘤微環(huán)境對免疫細(xì)胞的負(fù)調(diào)控，減少免疫細(xì)胞的耗竭，增強其殺瘤功能，減少腫瘤微環(huán)境對免疫細(xì)胞的抑制。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物細(xì)胞技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及可以分泌抗體、表達(dá)CAR的免疫細(xì)胞，優(yōu)化免疫細(xì)胞的殺傷功能，減少耗竭，減少腫瘤微環(huán)境對免疫細(xì)胞的抑制。

背景技術(shù)

近幾年來，腫瘤免疫療法發(fā)展迅速，尤其是過繼性細(xì)胞療法（ACT），即指從病人體內(nèi)分離出T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，通過體外修飾擴(kuò)增培養(yǎng)，隨后回輸入患者體內(nèi)進(jìn)行腫瘤治療的方法。2013年，腫瘤的免疫療法被Science雜質(zhì)評為“十大突破”之首。

CAR-T和TCR-T是過繼性細(xì)胞療法重要的組成部分，尤其CAR-T療法，在血液腫瘤的治療上取得了顯著的成就，取得了較高的緩解率，典型的CAR結(jié)構(gòu)由三部分組成，胞外識別腫瘤抗原的scFv、鉸鏈和跨膜結(jié)構(gòu)域、胞內(nèi)共刺激信號和激活結(jié)構(gòu)域。第一代的CAR并不包含胞內(nèi)共刺激信號，CAR-T細(xì)胞的殺傷活性較低且生存時間較短。因此，第二代CAR開始加入共刺激信號如CD28和4-1BB，采用不同的共刺激信號的CAR-T細(xì)胞的特性也不盡相同，CD28增強了CAR-T細(xì)胞的殺傷活性而4-1BB則增強CAR-T細(xì)胞殺傷活性的同時延長了CAR-T細(xì)胞的生存時間。隨后，出現(xiàn)了共同表達(dá)兩個共刺激信號域的三代CAR，然而其抗腫瘤效果并不如二代CAR-T。因此，現(xiàn)在臨床應(yīng)的主要為二代CAR-T細(xì)胞。

CAR-T療法不僅在血液腫瘤的治療上成果顯著，而且商業(yè)化進(jìn)展順利，美國FDA于2017年正式批準(zhǔn)了兩種CAR-T藥品上市。盡管CAR-T細(xì)胞療法在血液腫瘤的治療上大放異彩，而對于實體瘤卻并沒有較好的治療效果，緩解率低且容易發(fā)生脫靶等毒副作用。實體瘤微環(huán)境是CAR-T細(xì)胞不能有效發(fā)揮作用的重要因素之一，PD-1和CTLA-4是兩個重要的免疫負(fù)調(diào)控分子，在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞，免疫抑制細(xì)胞等通過這兩條途徑抑制免疫細(xì)胞功能，導(dǎo)致免疫細(xì)胞耗竭。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要針對上述問題，提供了一種可以分泌雙特異性抗體的表達(dá)CAR的免疫細(xì)胞，通過分泌的雙特異性抗體，阻斷PD-1、CTLA-4兩條負(fù)反饋途徑，從而減弱腫瘤微環(huán)境對免疫細(xì)胞的負(fù)調(diào)控，減少免疫細(xì)胞的耗竭，增強其殺瘤功能，減少腫瘤微環(huán)境對免疫細(xì)胞抑制。

一種分泌雙特異性抗體的免疫細(xì)胞，免疫細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體，并且表達(dá)分泌型的雙特異性抗體。

在其中一個實施例中，免疫細(xì)胞為T細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、gamma-delta T細(xì)胞、TIL細(xì)胞、TCR-T細(xì)胞或其它腫瘤殺傷細(xì)胞。

在其中一個實施例中，將表達(dá)嵌合抗原受體和分泌型的雙特異性抗體的基因轉(zhuǎn)入免疫細(xì)胞，基因放于表達(dá)框中。

在其中一個實施例中，表達(dá)框為包含嵌合抗原受體的核酸序列或表達(dá)anti-PD-1anti-CTLA-4雙特異性抗體。

在其中一個實施例中，表達(dá)嵌合抗原受體和分泌型的雙特異性抗體的基因的轉(zhuǎn)入方式為通過慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、普通質(zhì)粒載體、附加體載體、納米遞送系統(tǒng)、電轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)座子或其它遞送系統(tǒng)轉(zhuǎn)入。

在其中一個實施例中，分泌型的雙特異性抗體為靶向PD-1的scFv和/或靶向CTLA-4的scFv，所述分泌型的雙特異性抗體的中間由Fc鏈接。

在其中一個實施例中，嵌合抗原受體包括細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述胞外結(jié)構(gòu)域包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)和CD3ζ鏈部分，所述共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)指包括共刺激分子的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的一部分，所述共刺激分子為淋巴細(xì)胞對抗原的有效應(yīng)答所需要的細(xì)胞表面分子。