[發明專利]一種SARS-CoV-2病毒核酸檢測的引物組、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010813271.4
• 申請日: 2020-08-13
• 公開（公告）號: CN112029903B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 馬立新;王飛;何如怡;翟超;楊軍;劉洋;余曉;劉琳琳
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 丁倩

1.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括靶向目的基因SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的向導DNA，其中：

所述N基因的向導DNA為如SEQ ID NO.5所示的單鏈DNA分子；

所述ORF1ab基因的向導DNA為SEQ ID NO.6所示的單鏈DNA分子。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括用于擴增SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的引物組、針對SARS-CoV-2的N基因和/或ORF1ab基因的帶有熒光標記的分子信標和PfAgo酶。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述引物組中用于擴增N基因的引物對包括引物NF和引物NR；

所述引物NF為如SEQ ID NO.1所示的單鏈DNA分子；

所述引物NR為如SEQ ID NO.2所示的單鏈DNA分子；

所述引物組中用于擴增ORF1ab基因的引物對包括引物OF和引物OR；

所述引物OF為如SEQ ID NO.3所示的單鏈DNA分子；

所述引物OR為如SEQ ID NO.4所示的單鏈DNA分子。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述針對SARS-CoV-2的N基因的分子信標中的核酸序列為如SEQ ID NO.7所示的單鏈DNA分子；

所述針對SARS-CoV-2的ORF1ab基因的分子信標中的核酸序列為如SEQ ID NO.8所示的單鏈DNA分子。

5.如權利要求2-4任一項所述試劑盒的制備方法，其特征在于，為如下(1)或(2)：

(1)所述引物組、所述向導DNA、所述分子信標和所述PfAgo酶單獨包裝；

(2)所述引物組、所述向導DNA、所述分子信標和所述PfAgo酶按比例混合在一起。

6.如權利要求1-4任一項所述的試劑盒在鑒定或輔助鑒定新型冠狀病毒SARS-CoV-2的非疾病診斷和治療目的上的用途。

7.一種鑒定或輔助鑒定新型冠狀病毒SARS-CoV-2的非疾病診斷和治療目的的方法，其特征在于，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，采用如權利要求2-4任一項所述的試劑盒進行檢測；如檢測到的熒光值高于陰性對照、待測病毒為候選的新型冠狀病毒SARS-CoV-2，如果不滿足上述條件、待測病毒為候選的非新型冠狀病毒SARS-CoV-2。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

S1、以待測樣本中的核酸提取液為模板，采用如權利要求2中所述的引物組進行逆轉錄PCR對新型冠狀病毒SARS-CoV-2的待檢測區域進行擴增；

S2、將權利要求1中所述的向導DNA、權利要求2中所述的分子信標和PfAgo酶與所述S1步驟得到的PCR擴增產物混合，進行酶切反應；

S3、檢測上述反應體系中所述分子信標切割后產生的熒光情況，若熒光值與陰性對照相比有顯著差異，則判斷PCR產物中含有新型冠狀病毒SARS-CoV-2的特異性擴增產物，從而推斷樣品中含有SARS-CoV-2病毒；若熒光值與陰性對照相比沒有顯著差異，則判斷PCR產物中不含有新型冠狀病毒SARS-CoV-2的特異性擴增產物，從而推斷樣品中不含有SARS-CoV-2病毒。