[發明專利]一種雞顯性白快速基因分型檢測方法

在審

• 申請號: 202010809931.1
• 申請日: 2020-08-12
• 公開（公告）號: CN111893193A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉繼強
• 申請（專利權）人: 北京康普森農業科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858
• 代理公司: 天津垠坤知識產權代理有限公司 12248
• 代理人: 王忠瑋

本發明提供了一種雞顯性白快速基因分型檢測方法，涉及分子標記育種領域技術領域，以解決現有技術中存在的技術檢測操作繁瑣耗時長、應用范圍有限及檢測成本高的不足的技術問題，該裝置根據顯性白基因PMEL17及PMEL17基因外顯子10上的9bp插入位點設計引物，引物包括以下3種引物：核苷酸序列分別如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2及SEQ ID No.3所示的引物；建立PCR體系；進行PCR擴增，94℃預變性15min，94℃變性20s,55?61℃退火和延伸60s,進行10個循環；94℃變性20s，55℃退火和延伸60s，進行26個循環；94℃變性20s，57℃退火和延伸60s，進行3個循環；進行數據掃描得到顯性白控制基因的分型結果，本發明用于快速檢測雞顯性白控制基因PMEL17多態性。

技術領域

本發明涉及分子標記育種領域，具體涉及一種基于KASP檢測雞顯性白PMEL17基因多態性位點分型的方法。

背景技術

白羽雞可根據控制羽色基因位點不同分為顯性白羽和隱性白羽兩種。目前已知雞白羽性狀是由5對等位基因控制，控制白羽的5對等位基因對白羽性狀連鎖影響。根據研究這5對等位基因分別是：(1)抑制色素形成的基因I；(2)控制有色羽性狀的色素原基因C；(3)氧化酶基因O，與氧化酶形成有關；(4)色素表現基因P，與色表現有關；(5)非白化基因a，與有色性狀有關。通過分子標記技術已定位的分別是抑制色素形成的I基因和色素原C基因。

對于白羽的顯性基因I，Kerje等利用紅色原雞和白來航雜交建立的群體進行連鎖分析，發現顯性白基因座I對應的編碼基因為PMEL17(premelanosome protein，前黑素體蛋白)，該蛋白對于真黑素體的發育十分關鍵。序列分析顯示顯性白等位基因與PMEL17基因外顯子10上的9bp插入片段完全連鎖，該突變導致在PMEL17基因的跨膜域上插入了3個氨基酸。9bp的插入通過常規的分子生物學實驗檢測是非常困難的，近年來，發展了像單鏈構象多態技術(SSCP)、PCR-RFLP和直接測序等分子遺傳標記的方法。但這些方法都不同程度的因為操作繁瑣耗時長、應用范圍有限及檢測成本高等原因未得到廣泛應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雞顯性白快速基因分型檢測方法，以解決上述背景技術中提到的技術問題。本發明提供的諸多技術方案中的優選技術方案所能產生的諸多技術效果詳見下文闡述。

為實現上述目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供的一種雞顯性白快速基因分型檢測方法，具體步驟如下：

S1:根據顯性白基因PMEL17及PMEL17基因外顯子10上的9bp插入位點設計引物，所述引物包括以下3種引物：

核苷酸序列分別如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2及SEQ ID No.3所示的引物；

S2:建立PCR體系；

S3：進行PCR擴增，94℃預變性15min，94℃變性20s,55-61℃退火和延伸60s,進行10個循環；94℃變性20s，55℃退火和延伸60s，進行26個循環；94℃變性20s，57℃退火和延伸60s，進行3個循環；

S4：進行數據掃描得到顯性白控制基因的分型結果。

優選的，步驟S2中，建立的PCR體系中的DNA來自雞的血液，其中，雞血液中的DNA獲取方法如下：

S21：先向離心管中加入Proteinase K，之后再加入血液；

S22：向離心管中加入Buffer ML，渦旋振蕩5秒鐘使其充分混勻后，將離心管放于56℃水浴鍋中孵育15分鐘，期間渦旋震蕩混勻2次；