[發(fā)明專利]一種印跡脂肪酶及其合成蔗糖-6-乙酯的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010809917.1
• 申請日: 2020-08-13
• 公開（公告）號: CN112029754B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 錢俊青;趙長燕;茍李紅
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N11/082
• 分類號: C12N11/082;C12P19/12
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種印跡脂肪酶，其特征在于所述印跡脂肪酶按如下方法制備：將脂肪酶溶解在pH為6.5-8.5緩沖液中，超聲助溶，使脂肪酶充分溶解，有不溶成分則過濾去除，得到脂肪酶酶液；向脂肪酶酶液中，加入脂肪酸、糖醇，攪拌使其混合均勻，調(diào)節(jié)混合酶液pH為6.5-8.5，在20-30℃恒溫下，以120-160轉(zhuǎn)/分鐘的速度攪拌10-25分鐘后，立刻加入大孔樹脂，在25-35℃恒溫、60-100轉(zhuǎn)/分鐘下攪拌吸附3-6h，過濾，獲得濾液和濾餅；濾餅用蒸餾水洗滌后，真空干燥，獲得印跡脂肪酶；所述脂肪酸為C10-C18脂肪酸，所述糖醇為下列之一：山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇。

2.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述超聲助溶條件為：300W功率超聲5分鐘。

3.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述脂肪酸為下列之一：油酸、癸酸、棕櫚酸、硬脂酸、月桂酸。

4.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述緩沖液為0.05 mol/L、pH7.5的磷酸鈉緩沖液。

5.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述緩沖液體積用量以脂肪酶重量計為40-100ml/g；所述脂肪酶酶液中脂肪酶與脂肪酸重量比為1：2- 4.5；所述脂肪酶酶液中脂肪酶與糖醇重量比為1：8-23。

6.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述大孔樹脂的型號為下列之一：D4006、D3520、D1300；所述大孔樹脂添加量與脂肪酶酶液中脂肪酶重量比為20~55：1。

7.如權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶，其特征在于所述大孔樹脂在加入前先進行預(yù)處理，所述預(yù)處理方法為：將大孔樹脂置于燒杯中，加入體積濃度95%乙醇水溶液，于室溫、150r/min的條件下震蕩洗滌24小時，并于中途兩次更換體積濃度95%乙醇水溶液，震蕩結(jié)束后，每次用300ml蒸餾水洗滌五次，抽濾，濾液蒸餾回收乙醇，濾餅即為預(yù)處理后的大孔樹脂；所述體積濃度95%乙醇水溶液體積用量以大孔樹脂重量計為10ml/g。

8.一種權(quán)利要求1所述印跡脂肪酶在催化蔗糖合成蔗糖-6-乙酯中的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用的方法為：將蔗糖、印跡脂肪酶、4A分子篩加入叔戊醇與二甲基亞砜復(fù)配的溶劑中，再加入乙酸乙烯酯，混勻，40℃和180 r/min條件下振蕩反應(yīng)16h后，反應(yīng)液在4000r/min離心10min，取上層清液在真空度0.1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下80℃回收溶劑，獲得蔗糖-6-乙酯。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述蔗糖與乙酸乙烯酯的質(zhì)量之比為1:2.5；所述蔗糖與印跡脂肪酶重量比為1：9.7；所述蔗糖與4A分子篩重量比為1：9.7；所述叔戊醇、二甲基亞砜體積用量以蔗糖重量計分別為77.7ml/g和19.4ml/g。