[發(fā)明專利]一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的方法、試劑及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010805524.3
• 申請(qǐng)日: 2020-08-11
• 公開（公告）號(hào): CN111965342B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃愛;趙暢;甘華銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/546
• 代理公司: 北京眾達(dá)德權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

本發(fā)明提供了一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的方法，屬于免疫測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，包括：將膠乳微球與活化緩沖液混勻后加入活化劑進(jìn)行一次活化；一次活化完畢后加入所述活化劑進(jìn)行二次活化；抗體經(jīng)偶聯(lián)緩沖液稀釋后加入到二次活化后的膠乳微球中，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)；向偶聯(lián)反應(yīng)后的反應(yīng)液中加入封閉液1，所述封閉液1為TRIS溶液；反應(yīng)完成后再加入封閉液2，所述封閉液2為BSA溶液；反應(yīng)完成后進(jìn)行離心、重懸膠乳微球。該方法可同時(shí)提高膠乳免疫比濁法檢測(cè)試劑的線性范圍和長(zhǎng)期穩(wěn)定性。本發(fā)明還提供了一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的試劑及試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的方法、試劑及試劑盒。

背景技術(shù)

近年來，隨著市場(chǎng)需求，對(duì)很多膠乳免疫比濁試劑的線性范圍的要求越來越高。比如肌紅蛋白項(xiàng)目，當(dāng)心肌和骨骼肌損傷時(shí)，血中肌紅蛋白明顯增高，心肌梗死發(fā)病后4～12h內(nèi)，血清中肌紅蛋白含量可達(dá)高峰，濃度甚至可高達(dá)1000mg/L以上，市場(chǎng)上絕大部分肌紅蛋白測(cè)定試劑盒(膠乳免疫比濁法)的線性只能達(dá)到800mg/L左右，遇到臨床高值會(huì)出現(xiàn)hook效應(yīng)，影響結(jié)果的判斷，不能滿足臨床需要。再比如RBP，血清RBP水平與人體腎功能密切相關(guān)，當(dāng)腎臟疾病發(fā)生時(shí)，由于腎小球?yàn)V過率下降，腎小管重吸收障礙，血清和尿液中RBP均顯著增高，濃度可高達(dá)200mg/L以上。常規(guī)RBP測(cè)量范圍是3-140mg/L，因此，高線性的RBP測(cè)定試劑才能更好的滿足臨床需要，諸如此類的項(xiàng)目還有很多，比如血清淀粉樣蛋白A，SAA是急性相蛋白，機(jī)體受感染后，4-6h內(nèi)即可迅速升高約1000倍，清除病原體后又可迅速的降低至正常水平，是反映機(jī)體感染情況和炎癥恢復(fù)的靈敏指標(biāo)。

膠乳免疫比濁法對(duì)于膠乳檢測(cè)試劑寬線性范圍的需求較常見。另外，膠乳免疫比濁試劑的穩(wěn)定性也是一個(gè)非常重要的性能指標(biāo)，而膠乳免疫比濁法中對(duì)膠乳封閉效果的好壞直接影響了試劑的穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有膠乳檢測(cè)試劑線性范圍和穩(wěn)定性不足的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的方法，該方法可同時(shí)提高膠乳免疫比濁法檢測(cè)試劑的線性范圍和長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

本發(fā)明還提供了一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的試劑及試劑盒。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩(wěn)定性的方法，包括：

將膠乳微球與活化緩沖液混勻后加入活化劑進(jìn)行一次活化；

一次活化完畢后加入所述活化劑進(jìn)行二次活化；

抗體經(jīng)偶聯(lián)緩沖液稀釋后加入到二次活化后的膠乳微球中，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)；

向偶聯(lián)反應(yīng)后的反應(yīng)液中加入封閉液1，所述封閉液1為TRIS溶液；

反應(yīng)完成后再加入封閉液2，所述封閉液2為BSA溶液；

反應(yīng)完成后進(jìn)行離心、重懸膠乳微球。

其中，所述膠乳微球包括羧基聚苯乙烯膠乳微球，固體含量為5％-10，粒徑為100-200nm。

進(jìn)一步的，所述活化劑為EDC，膠乳微球與EDC的總質(zhì)量比為25∶4，所述一次活化與二次活化的反應(yīng)溫度均為37℃，反應(yīng)時(shí)間10-20min。

進(jìn)一步的，所述TRIS溶液濃度為200mM，pH＝8.0，所述BSA溶液質(zhì)量濃度為10％，膠乳微球與TRIS及BSA的體積比為1∶2∶2。

進(jìn)一步的，加入所述封閉液1后，30-37℃恒溫反應(yīng)0.5-1h，加入所述封閉液2后，30-37℃恒溫反應(yīng)0.5-1h。

進(jìn)一步的，所述抗體為RBP抗體、Mb抗體和SAA抗體中的任意一種，所述偶聯(lián)反應(yīng)溫度為37℃，反應(yīng)時(shí)間2h。