[發明專利]一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩定性的方法、試劑及試劑盒有效
| 申請號： | 202010805524.3 | 申請日： | 2020-08-11 |
| 公開（公告）號： | CN111965342B | 公開（公告）日： | 2023-08-29 |
| 發明（設計）人： | 黃愛;趙暢;甘華銘 | 申請（專利權）人： | 武漢生之源生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/543 | 分類號： | G01N33/543;G01N33/546 |
| 代理公司： | 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570 | 代理人： | 張曉冬 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖開發區高*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 膠乳 免疫 法線 范圍 穩定性 方法 試劑 試劑盒 | ||
1.一種提高膠乳免疫比濁法線性范圍和穩定性的試劑盒，其特征在于，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1包括以下成分：
2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液：0.1-0.2mol/L?pH7.0；EDTA-2Na：0.5g/L；氯化鈉：0.08mol/L；Brij-35：0.1%-0.5%；疊氮化鈉：0.1%；
所述試劑R2通過以下方法制備:
制備原料溶液，包括：
溶液a.活化緩沖液：50?mmol/L?HEPES緩沖液，PH值為6.0；
溶液b.偶聯緩沖液：50?mmol/L?HEPES緩沖液，PH值為7.4；
溶液c.活化劑：按照10mg/ml的濃度稱量EDC，現配現用；
溶液d.封閉液1：200mM?TRIS?pH=8.0；
溶液e.封閉液2：10%BSA；
溶液f.R2緩沖液：50mmol/L?HEPES，0.5g/L的EDTA-2Na，5%海藻糖，0.1%PC-300，pH值為7.4；
制備膠乳試劑，包括：
①取粒徑為100nm-200nm的膠乳微球1mL與溶液a按體積比1:6進行混合后混勻；
②向步驟①中加入0.4mL的10mg/ml的溶液c，混勻，并置于恒溫搖床中反應20min，溫度：37℃；
③向步驟②中加入0.4mL的10mg/ml的溶液c，混勻，并置于恒溫搖床中反應20min，溫度：37℃；
④用溶液b把RBP抗體稀釋至1mg/mL，向步驟③中加入5mL的1mg/ml稀釋后的RBP抗體，混勻，并置于恒溫搖床中反應2h，溫度：37℃；
⑤向步驟④中加入2mL的溶液d，混勻，并置于恒溫搖床中反應1h，溫度：37℃；
⑥向步驟⑤中加入2mL的溶液e，混勻，并置于恒溫搖床中反應1h，溫度：37℃；
⑦反應完成后離心并去除上清液，轉速為16000rpm，離心時間為40分鐘；
⑧去除上清液，并用50mL溶液f復溶，重懸膠乳微球，重懸過程中使用細胞破碎儀輔助重懸。
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