[發(fā)明專利]一種改進(jìn)的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜人血清中15種膽汁酸的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010799383.9
• 申請(qǐng)日: 2020-08-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112098532A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬金飛;楊青青;孔子清;劉華芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州凱萊譜精準(zhǔn)醫(yī)療檢測(cè)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 杭州宇信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33231
• 代理人: 李學(xué)紅

1.一種改進(jìn)的人血清中15種膽汁酸的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)溶液的配制；

A.一級(jí)儲(chǔ)備液的配制：精密稱取人血清中膽汁酸標(biāo)準(zhǔn)品，加入20％甲醇溶液溶解稀釋得到一級(jí)儲(chǔ)備液；

B.二級(jí)混合儲(chǔ)備液的配制：依次將適量的一級(jí)儲(chǔ)備液加入到同一離心管中，渦旋混勻，得到二級(jí)混合儲(chǔ)備液(MIX01)；

C.標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：量取二級(jí)混合儲(chǔ)備液(MIX01)，加入20％甲醇溶液，混合均勻，得到三級(jí)混合儲(chǔ)備液(MIX02)；用甲醇分別稀釋三級(jí)儲(chǔ)備溶液配成標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；

D.內(nèi)標(biāo)工作液配制：精密稱取4種內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，加入20％甲醇溶液溶解稀釋得到1mg/mL的氘代甘氨膽酸(GCA-d5)、氘代牛磺膽酸(TCA-d5)、氘代牛磺脫氧膽酸(TDCA-d4)和氘代牛磺熊脫氧膽酸(TUDCA-d5)的一級(jí)儲(chǔ)備液；取GCA-d5一級(jí)儲(chǔ)備液、TCA-d5一級(jí)儲(chǔ)備液、TDCA-d4一級(jí)儲(chǔ)備液和TUDCA-d5一級(jí)儲(chǔ)備液，合并，用20％甲醇溶液稀釋，渦旋混勻，得到內(nèi)標(biāo)二級(jí)混合儲(chǔ)備液；取內(nèi)標(biāo)二級(jí)混合儲(chǔ)備液加入到20％甲醇溶液中得到內(nèi)標(biāo)工作液；

(2)取人血清樣本，加入離心管中，一次加入甲醇和內(nèi)標(biāo)工作液，1500rpm渦旋，14000g離心；

(3)取步驟(2)處理得到的上清液，加入20％甲醇溶液作為稀釋劑，渦旋混勻后，上SCIEX 4500MD三重四級(jí)桿高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)樣20μL分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述人血清中15種膽汁酸包括膽酸(CA)、脫氧膽酸(DCA)、鵝脫氧膽酸(CDCA)、熊脫氧膽酸(UDCA)、石膽酸(LCA)、甘氨膽酸(GCA)、甘氨脫氧膽酸(GDCA)、甘氨鵝脫氧膽酸(GCDCA)、甘氨熊脫氧膽酸(GUDCA)、甘氨石膽酸(GLCA)、牛磺膽酸(TCA)、牛磺脫氧膽酸(TDCA)、牛磺鵝脫氧膽酸(TCDCA)、牛磺熊脫氧膽酸(TUDCA)和牛磺石膽酸(TLCA)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，步驟(3)所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定經(jīng)預(yù)處理后的樣品溶液，采用梯度洗脫反相色譜法建立待測(cè)物的分離條件為：色譜柱為C8柱、C18柱或者苯基柱，填料粒徑為1.7～5μm，內(nèi)徑為2.1～4.6mm，柱長(zhǎng)為25～150mm，柱溫為35～50℃；流動(dòng)相A為5mM醋酸銨溶液，流動(dòng)相B為甲醇，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的體積比為35～2％：65～98％；A相與B相按梯度程序洗脫，流動(dòng)相流速為0.4～1mL/min。