[發(fā)明專(zhuān)利]一種干細(xì)胞凍存液

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010797418.5
• 申請(qǐng)日: 2020-08-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111727962B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寇曉星;施松濤
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 醫(yī)微細(xì)胞生物技術(shù)（廣州）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/071
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/071;A01N1/02
• 代理公司: 北京市萬(wàn)慧達(dá)律師事務(wù)所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種干細(xì)胞凍存液。所述干細(xì)胞凍存液包含基礎(chǔ)凍存液，并添加有異硫氰酸苯乙酯，所述異硫氰酸苯乙酯在所述干細(xì)胞凍存液體中的濃度為0.1?10μM，所述基礎(chǔ)凍存液包含5 v/v％~10v/v％的DMSO和90 v/v％?95v/v%的FBS；所述干細(xì)胞為牙髓干細(xì)胞。用所述凍存液凍存的牙髓干細(xì)胞復(fù)蘇后，其增殖能力得到顯著地提升，可以極大地提升牙髓干細(xì)胞分離培養(yǎng)的效率。能夠更好地使得牙髓干細(xì)胞適用于臨床應(yīng)用。具有很好的現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種干細(xì)胞凍存液。

背景技術(shù)

據(jù)報(bào)道，牙髓干細(xì)胞在牙周炎治療中可起到很好的修復(fù)作用，作用機(jī)制為：通過(guò)植入局部并分化為缺損細(xì)胞，分泌細(xì)胞因子，趨化干細(xì)胞到局部，抑制局部炎癥，促進(jìn)局部血管新生。

在牙髓干細(xì)胞的臨床應(yīng)用中涉及到牙髓干細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇技術(shù)，細(xì)胞凍存是將37℃生長(zhǎng)培養(yǎng)的細(xì)胞，添加營(yíng)養(yǎng)成分及防凍保護(hù)劑DMSO，通過(guò)逐漸降溫的方式將細(xì)胞長(zhǎng)期超低溫凍存于液氮中的過(guò)程。

凍存過(guò)程會(huì)顯著改變細(xì)胞的熱力學(xué)、化學(xué)和物理環(huán)境，有伴隨造成生物性損傷的危險(xiǎn)。溫度的變化主要取決于降溫或升溫方法所引起的熱傳導(dǎo)的邊界條件，也受細(xì)胞復(fù)融過(guò)程中潛熱效應(yīng)的影響。為了將凍融過(guò)程中細(xì)胞的損傷降至最低，必須進(jìn)一步優(yōu)化化學(xué)和溫度操作過(guò)程。但需要在降溫前加入一種或兩種低溫保護(hù)劑，在溶解后又將其去除。

目前，細(xì)胞的凍存除了采用二甲基亞砜(DMSO)對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行凍存，還會(huì)采用普通商品化的培養(yǎng)基或血清進(jìn)行細(xì)胞凍存。

牙髓干細(xì)胞在制備過(guò)程中不僅極易污染，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量較少，生長(zhǎng)緩慢。并且，還常因?yàn)檠浪栝g充質(zhì)干細(xì)胞不易貼壁造成細(xì)胞損失。目前的這些凍存液在細(xì)胞的凍存過(guò)程中還是會(huì)無(wú)法避免地對(duì)牙髓干細(xì)胞造成一定的損傷，無(wú)法保證干細(xì)胞的活力，細(xì)胞增殖率較低，影響干細(xì)胞的臨床利用。

發(fā)明內(nèi)容

一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞凍存液，能夠促進(jìn)凍存后細(xì)胞增殖。

一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞凍存液，能夠明顯促進(jìn)凍存后的牙髓干細(xì)胞增殖。

一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種干細(xì)胞凍存液，所述細(xì)胞凍存液含有異硫氰酸苯乙酯。

一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.1-10 μM。

一些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞凍存液包含基礎(chǔ)凍存液，并添加有異硫氰酸苯乙酯，所述異硫氰酸苯乙酯在所述干細(xì)胞凍存液體中的濃度為0.1-10 μM，所述基礎(chǔ)凍存液包含5v/v％~10v/v％的DMSO和90 v/v％-95v/v% 的FBS。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液包括以下成分：異硫氰酸苯乙酯0.1-10 μM，DMSO 5v/v％~15v/v％，F(xiàn)BS 90 v/v％-95v/v%；所述干細(xì)胞為牙髓干細(xì)胞。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用所述凍存液凍存牙髓細(xì)胞后進(jìn)行復(fù)蘇，細(xì)胞的增殖能力與普通的凍存液相比，增殖能力得到顯著地提升。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.01-30 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.05-20 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.1-20 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.5-20 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯0.5-10 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯1-15 μM。

一些實(shí)施方案中，所述凍存液含有異硫氰酸苯乙酯1-10 μM。