[發(fā)明專利]一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010796477.0 | 申請日： | 2020-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN111826410A | 公開（公告）日： | 2020-10-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉曉紅 | 申請（專利權(quán)）人： | 遼東學院 |
| 主分類號： | C12P19/40 | 分類號： | C12P19/40;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 崔瑞迎 |
| 地址： | 118001 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 固體 培養(yǎng)基 獲得 高產(chǎn) 蟲草 方法 | ||
本發(fā)明涉及蟲草素提取技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法，包括制備固體培養(yǎng)基和蠶蛹液，蠶蛹液涂布，條件差異培養(yǎng)提高培養(yǎng)基中蟲草素含量，去除子實體，檢測培養(yǎng)基中蟲草素含量。本發(fā)明的方法在培養(yǎng)蛹蟲草的過程中，大大提高了固體培養(yǎng)基中蟲草素的積累量。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及蟲草素提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法。
背景技術(shù)
蟲草素學名為3′-脫氧腺苷，是從蛹蟲草中提取出來的一種天然生物活性物質(zhì)。蟲草素的分子式為CsHyON，相對分子質(zhì)量為251.25，能溶于水，乙醇，蟲草素為含氮配糖體的核酸銜生物,屬嘌呤類生物堿。蟲草素是一種核甙類新藥.20世紀70年代被發(fā)現(xiàn)有抑制腫瘤、抗瘧原蟲和抑制mRNA翻譯的作用:20世紀90年代研究發(fā)現(xiàn)，添加腺甙脫氨酶(adenosinedea minase,ADA)抑制劑對其抗腫瘤活性的表達起著重要作用。蟲草素能干擾基因細胞RNA和DNA的合成,抑制癌細胞等不正常細胞的分裂,并能作為區(qū)別細胞中不同的RNA聚合酶的工具；同時，蟲草素還表現(xiàn)出極強的抗真菌、抗HIV-I型病毒和選擇性抑制梭菌的活性，引起醫(yī)藥學界的高度重視,蟲草素在美國作為抗癌、抗病毒新藥已經(jīng)進人三期臨末床。
目前，蟲草素獲得的途徑大部分通過子實體獲得，然后這種途徑相當昂貴，我們發(fā)現(xiàn)蛹蟲草的發(fā)酵培養(yǎng)基中能夠獲得蟲草素，且含量不比子實體中低，通過培養(yǎng)發(fā)酵獲得蟲草素，但是大部分通過培養(yǎng)基發(fā)酵均為液體發(fā)酵，但是液體發(fā)酵容易被污染，雖然固體培養(yǎng)能夠降低污染率，但固體培養(yǎng)獲得的蟲草素含量低，通常低于1.8mg/g。因此，本發(fā)明提出一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法。
發(fā)明內(nèi)容
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法，通過在固體培養(yǎng)基表面涂布蠶蛹液以及條件差異培養(yǎng)大大提高了固體培養(yǎng)基中蟲草素含量。
本發(fā)明提供了一種利用固體培養(yǎng)基獲得高產(chǎn)蟲草素的方法，包括以下步驟：
S1，制備固體培養(yǎng)基和蠶蛹液，滅菌；
所述固體培養(yǎng)基配方為：KH2PO4 1-5g，MgSO41-3g,維生素B1 2-7g,維生素B2 1-5g，葡萄糖2-3g，蛋白胨2-4g，蠶蛹粉4-6g，大米4-12g，玉米渣2-4g，蕎麥粉2-6g，椰子殼顆粒2-5g，蒸餾水100-300ml，pH調(diào)至6.2-8.3；
所述蠶蛹液由蠶蛹粉、甘氨酸、腺嘌呤和蒸餾水混合而成；
將上述固體培養(yǎng)基分裝后與蠶蛹液置于121℃下滅菌20-30min；
S2，接種前在固體培養(yǎng)基中加入蠶蛹液并涂布均勻；
S3，通過條件差異培養(yǎng)提高培養(yǎng)基中蟲草素含量：
將提前備好的產(chǎn)蟲草素菌種接種于固體培養(yǎng)基中，于14-20℃下黑暗培養(yǎng)6-10d后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度至18-30℃繼續(xù)黑暗培養(yǎng)14-20d，然后進行晝夜變換培養(yǎng)；
所述晝夜交替培養(yǎng)具體為：白天在溫度18-30℃、光照200-500lx下進行培養(yǎng)12-14h，夜間在黑暗條件，溫度為10-12℃下培養(yǎng)10-12h；
上述所述晝夜交替培養(yǎng)時間為8-12d；
然后調(diào)整光照為1000-2500lx，溫度于18-30℃下繼續(xù)培養(yǎng)2-4d；
S4，去除S2中培養(yǎng)基中的子實體，檢測培養(yǎng)基中蟲草素含量。
優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基中的椰子殼顆粒是由椰子殼粉碎成粒徑為5-7mm的顆粒。
優(yōu)選的，所述蠶蛹粉、甘氨酸、腺嘌呤和蒸餾水混合用量比為1g：1g：1g：100-200ml。
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