[發(fā)明專利]用于檢測冠狀病毒抗體的檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2020-08-10
• 公開（公告）號: CN111812336A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 張正陽;劉向暉;王明;陳勝勝;汪春芳
• 申請（專利權）人: 蘇州康和順醫(yī)療技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 俞春雷

本發(fā)明公開了一種用于檢測冠狀病毒抗體的檢測試劑盒，包括第一試劑和第二試劑，所述第一試劑為含有第一微球的溶液，所述第一微球為包被冠狀病毒重組蛋白的膠乳微球；所述第二試劑為含有第二微球的溶液，所述第二微球為包被抗冠狀病毒重組蛋白抗體的膠乳微球。本發(fā)明的檢測試劑盒將新型冠狀病毒重組蛋白抗原及配對的單克隆抗體分別包被在膠乳微球上，利用包被重組蛋白抗原的膠乳微球首先和待測樣本中新型冠狀病毒抗體結合，然后再和包被有抗重組蛋白單克隆抗體的膠乳微球結合的間接競爭法，通過溶液吸光度(吸光度)的變化來判斷待測樣本中是否存在新型冠狀病毒抗體。本發(fā)明的用于檢測新型冠狀病毒抗體的檢測試劑盒，特異性強、靈敏度高，檢測范圍寬，且能夠大幅降低試劑成本。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種用于檢測冠狀病毒抗體的檢測試劑盒和該檢測試劑盒的制備方法。

背景技術

新型冠狀病毒引發(fā)的肺炎是一種急性傳染性疾病，其病原體是一種之前未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒，即SARS-CoV-2，其引起的疾病則被世界衛(wèi)生組織命名為COVID-19，主要通過呼吸道飛沫和密切接觸傳染傳播，具有很強的傳染性，人群普遍容易感染。

由新型冠狀病毒引發(fā)的肺炎疫情發(fā)展至今，需要大規(guī)模快速準確地篩查樣本，為新型冠狀病毒感染者的臨床診斷提供依據(jù)，為企業(yè)復工復產提供快速及時的判斷結果。為滿足市場需求，眾多診斷行業(yè)的從業(yè)者開發(fā)出了一系列的新型冠狀病毒檢測試劑盒，主要包括核酸檢測和抗體檢測兩大類。核酸檢測一般通過PCR方法來判斷樣本中是否存在新冠病毒的核酸序列，從而判斷被檢人員是否感染病毒。而抗體檢測則是根據(jù)免疫學的基本原理，病毒感染時人體免疫系統(tǒng)會產生相對應的抗體，通過檢測樣本中是否存在新冠病毒抗體，可以間接地判斷被檢人員是否感染病毒。

基于PCR技術的核酸檢測準確度高，但是耗時較長，需要專門的儀器設備和場所，同時對操作人員要求也比較高，難以在基層推廣用于群體性篩查?，F(xiàn)有的抗體檢測主要有膠體金和化學發(fā)光兩類方案。膠體金方法操作簡單，速度快，適合快檢等即時檢測的市場。它的缺點是不能自動化，無法進行大批量篩查，同時靈敏度不高，而且重復性不易控制好?；诨瘜W發(fā)光方法的抗體檢測方案適合高通量篩選，但是需要配套的儀器，市場上現(xiàn)有的化學發(fā)光產品的儀器平臺都是封閉平臺，試劑不能通用，非常不利于推廣，同時也不方便用于即時檢測等快檢場景。

膠乳增強免疫比濁法(Particles Enhanced Turbidity Immuno-Assay-PETIA)利用吸附在直徑幾十到幾百納米膠乳微球上的抗原或者抗體捕捉待測樣本中的抗體或者抗原，從而形成微球之間的交聯(lián)，改變了溶液的散射度或者透射吸光度(即濁度)。通過測量溶液的散射度或者透射吸光度的變化，可以定性或者定量地知道待測物的濃度。常規(guī)的膠乳增強免疫比濁試劑包括R1和R2兩個部分。R1為稀釋液，用來稀釋測試樣本，R2是膠乳微球溶液，用來產生吸光度變化。上述的比濁法和采用常規(guī)競爭法設計的膠乳試劑，需要單個新冠病毒抗原同時橋聯(lián)兩個以上微球上的抗體，才能引起濁度變化。這個反應的效率很低，導致在樣本中有較高濃度的抗體時才能有比較明顯的濁度變化，因而導致檢測的靈敏度下降。

發(fā)明內容

有鑒于此，為了克服現(xiàn)有技術的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種改進的用于檢測冠狀病毒抗體的檢測試劑盒，靈敏度高，特異性強，且試劑成本降低。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下的技術方案：

一種用于檢測冠狀病毒抗體的檢測試劑盒，包括第一試劑和第二試劑，所述第一試劑為含有第一微球的溶液，所述第一微球為包被冠狀病毒重組蛋白的膠乳微球；所述第二試劑為含有第二微球的溶液，所述第二微球為包被抗冠狀病毒重組蛋白抗體的膠乳微球；所述抗體為單克隆抗體。

在本申請中，包被指的是將抗原或抗體結合到固相載體(膠乳微球)的表面。在本申請的檢測試劑盒的實際產品中，第二試劑的量可以遠小于第一試劑的量，優(yōu)選第一試劑和第二試劑的體積比為3～5:1。