[發明專利]一種神經脫細胞預處理方法

有效

• 申請號: 202010795522.0
• 申請日: 2020-08-10
• 公開（公告）號: CN111714701B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 敖強;毓天昊;張興棟
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 成都市集智匯華知識產權代理事務所(普通合伙) 51237
• 代理人: 陳慕華

1.一種神經脫細胞預處理方法，所述方法包括如下步驟：

（1）將神經在高滲溶液中處理12-24小時后，再在低滲溶液中處理12-24小時；

（2）將步驟（1）處理的神經置入硅膠模具中，垂直放在提前預冷的鋼板上，再整體移入冷凍箱中冷凍1-1.5小時，再將放有神經的硅膠模具放入冷凍干燥裝置中，凍干12-24小時，得到具有微通道的神經；

（3）將步驟（2）得到的神經沿著神經長軸縱向插入鋼針，移去鋼針，得到內部形成大通道的神經。

2.根據權利要求1所述的預處理方法，其特征在于，所述步驟（1）中的神經來自異種神經或同種異體神經，其中，異種神經包括來自猴、豬、牛、羊、馬、狗、鼠的神經，同種異體神經包括來自人或人的尸體的神經。

3.根據權利要求1所述的預處理方法，其特征在于，所述高滲溶液選自質量濃度為5-10%的氯化鈉溶液、10-20%葡萄糖溶液、10-20%的甘露醇溶液中的一種或兩種以上的組合；所述低滲溶液為蒸餾水、質量濃度＜0.9%的氯化鈉溶液、質量濃度＜5%的葡萄糖溶液中的一種或兩種以上的組合。

4.根據權利要求1所述的預處理方法，其特征在于，所述步驟（2）中鋼板預冷溫度為-80℃，冷凍箱溫度為負40℃-負20℃之間。

5. 根據權利要求1所述的預處理方法，其特征在于，所述步驟（3）中插入鋼針的數量依據神經直徑決定，鋼針的長度貫穿神經全長，插入5-8根，鋼針直徑為100-200 μm。

6.根據權利要求1-5任一所述的預處理方法，其特征在于，所述神經脫細胞預處理方法具體包括：

（1）將神經在濃度為6-8%的氯化鈉溶液中震蕩處理12小時，再將神經放入蒸餾水中震蕩處理12小時，震蕩速率為120-150 rpm；

（2）將步驟（1）處理的神經置入硅膠模具中，垂直放在預冷至-80℃的鋼板上，再整體移入-40℃冷凍箱中冷凍1小時，再將放有神經的硅膠模具放入冷凍干燥裝置中，凍干24小時，得到具有微通道的神經；

（3）移除硅膠模具，沿著神經長軸縱向插入5-8根鋼針，移去鋼針，得到內部形成大通道的神經。

7.一種神經脫細胞方法，所述方法包括如下步驟：

（1）按照權利要求1-6任一所述的方法對神經進行預處理；

（2）將預處理后的神經重新水化；

（3）將步驟（2）得到的神經置入體積濃度為1-2%的Triton X-100溶液中處理12-24小時，用蒸餾水洗滌3-5次，再轉移到質量濃度為5-6%的CHAPS溶液中處理12-24小時，用蒸餾水洗滌3-5次，實現脫細胞。

8. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）具體脫細胞方法如下：用體積濃度為2％的Triton X-100溶液震蕩處理神經24小時，用蒸餾水洗滌3次，每次15分鐘，再轉移到質量濃度為6％的CHAPS溶液中震蕩處理24小時，用蒸餾水洗滌3次，每次15分鐘，獲得脫細胞神經，置入含1%雙抗的PBS 溶液中4℃保存備用。

9.一種脫細胞神經，所述神經通過權利要求7-8任一所述的神經脫細胞方法制備得到。

10.一種權利要求9所述的脫細胞神經在神經移植中的應用。