[發(fā)明專(zhuān)利]一種HBP的磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010795512.7
• 申請(qǐng)日: 2020-08-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111679086B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王明;陳勝勝;劉向暉;汪春芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州康和順醫(yī)療技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種肝素結(jié)合蛋白的磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒及其制備方法，以及其在肝素結(jié)合蛋白免疫學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。所述磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒包括鏈霉親和素包被的磁微粒懸浮溶液、生物素標(biāo)記的肝素結(jié)合蛋白捕獲抗體和生物素標(biāo)記的牛血清白蛋白混合溶液、發(fā)光標(biāo)記物偶聯(lián)的肝素結(jié)合蛋白檢測(cè)抗體溶液以及肝素結(jié)合蛋白系列校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。本發(fā)明中的試劑盒利用磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法的優(yōu)勢(shì)，在使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)標(biāo)本中肝素結(jié)合蛋白時(shí)，具有操作簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)，靈敏度高，線性范圍寬等特性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)免疫診斷試劑領(lǐng)域，特別涉及基于化學(xué)發(fā)光法的肝素結(jié)合蛋白檢測(cè)。

背景技術(shù)

肝素結(jié)合蛋白(Heparin Binding Protein-簡(jiǎn)稱(chēng)HBP)是一種中性粒細(xì)胞分泌的顆粒蛋白，具有殺菌作用，同時(shí)也參與炎癥反應(yīng)和凝血過(guò)程的調(diào)節(jié)。1984年，Shafer等人首次發(fā)現(xiàn)并分離出這種蛋白，根據(jù)其正電性的特征和殺菌的功能命名為CAP37(CationicAntimicrobial Protein,分子量37kDa)。后來(lái)又陸續(xù)有人從多形核白細(xì)胞中的嗜苯胺藍(lán)顆粒中分離出天青殺素(Azurocidin)，以及與肝素有很強(qiáng)結(jié)合能力的肝素結(jié)合蛋白(HBP-Heparin Binding Protein)。進(jìn)一步的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因測(cè)序的研究表明，這三種蛋白實(shí)際上是同一種蛋白，在本發(fā)明中統(tǒng)一用肝素結(jié)合蛋白來(lái)代表。肝素結(jié)合蛋白是一種多功能的蛋白，可以通過(guò)結(jié)合血管上皮細(xì)胞，改變血管通透性，誘導(dǎo)血漿滲漏和炎癥反應(yīng)。肝素結(jié)合蛋白還能夠趨化和激活單核白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，應(yīng)對(duì)細(xì)菌感染，參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。最近的一些研究工作表明，血漿中的肝素結(jié)合蛋白的濃度與膿毒癥以及膿毒癥休克有很強(qiáng)的相關(guān)性。膿毒癥是全身性的感染炎癥反應(yīng)，會(huì)引起體溫改變、心率加快、呼吸急促等癥狀，導(dǎo)致全身凝血功能紊亂和免疫炎癥反應(yīng)失衡，誘發(fā)器官功能衰竭，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生膿毒癥休克甚至死亡。醫(yī)學(xué)界對(duì)膿毒癥的病原機(jī)理還不是十分清楚，及早地預(yù)測(cè)膿毒癥的發(fā)生能有效地防止膿毒癥引起的器官衰竭以及死亡。Linder等人(Adam Linder et al,Critical CareMedicine,2015,43:2378-2386)的研究表明作為參與炎癥反應(yīng)的肝素結(jié)合蛋白，能夠有效地預(yù)測(cè)膿毒癥以及膿毒癥休克的發(fā)生，是一個(gè)很好的臨床診斷指標(biāo)。

檢測(cè)肝素結(jié)合蛋白(HBP)的代表產(chǎn)品是英國(guó)Axis-Shield公司的酶聯(lián)免疫分析試劑盒(國(guó)械注進(jìn)20162400300)。酶聯(lián)免疫分析法是在96孔板上包覆捕捉抗體，當(dāng)含有抗原的樣品在孔中培養(yǎng)時(shí)，包覆在孔內(nèi)的抗體通過(guò)抗體抗原反應(yīng)捕捉樣品中的抗原，然后用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體與抗原結(jié)合，形成抗體-抗原-抗體的三明治結(jié)構(gòu)。標(biāo)記好的的酶可以與相應(yīng)的底物定量地發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量特定波長(zhǎng)下的吸光度變化，可以定量檢出樣品中的抗原濃度。酶聯(lián)免疫分析法可以準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中的肝素結(jié)合蛋白濃度，但是實(shí)際操作中酶聯(lián)免疫分析(ELISA)實(shí)驗(yàn)耗時(shí)比較長(zhǎng)，一般需要4至5小時(shí)才能得到檢測(cè)結(jié)果，作為預(yù)測(cè)膿毒癥及炎癥反應(yīng)的重要指標(biāo)，不能夠很好地滿足門(mén)診或者急診的快速檢測(cè)的需求。同時(shí)96孔板只能是每8孔進(jìn)行拆卸，不能夠做到單人份測(cè)試，且檢測(cè)范圍只能覆蓋5.9-200.0ng/mL，由于臨床上報(bào)道的HBP值高于檢測(cè)范圍上限的例子較多，該試劑盒的使用上存在局限性。其他報(bào)道的檢測(cè)方法還有CN204882574U公開(kāi)的膠體金法和CN204882575U公開(kāi)的免疫熒光層析的方法。膠體金法和免疫熒光層析法雖然可以快速檢測(cè)，但是只能進(jìn)行定性或者半定量的檢測(cè)，準(zhǔn)確度低，無(wú)法提供精確的臨床判斷依據(jù)。同時(shí)受限于方法本身，由于使用的是非均相反應(yīng)體系，檢測(cè)的精密度差，且無(wú)法從操作程序上清除干擾物，使得測(cè)試的準(zhǔn)確性不能得到保障。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述現(xiàn)有各種方法的不足，本發(fā)明的目的是提供靈敏度高、特異性好、線性范圍寬、能夠快速準(zhǔn)確的檢測(cè)血液樣本中的肝素結(jié)合蛋白(HBP)濃度的化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)試劑盒及其制備方法。