[發明專利]一種馬立克氏病病毒血清1型熒光定量PCR試劑盒及其應用在審
| 申請號： | 202010794930.4 | 申請日： | 2020-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN111733296A | 公開（公告）日： | 2020-10-02 |
| 發明（設計）人： | 陳曉春;蘇佳;趙煒;吳華偉;黃小潔;曹明慧;鄧永;孔冬妮;薛青紅 | 申請（專利權）人： | 中國獸醫藥品監察所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305 | 代理人： | 鄭明 |
| 地址： | 100081 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種馬 立克氏病 病毒 血清 熒光 定量 pcr 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種馬立克氏病病毒血清1型熒光定量PCR試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包含特異性引物、相應的Taqman探針、qPCR Buffer(2×)、酶、標準品質粒、無酶水；
所述的特異性引物和相應的Taqman探針，其序列分別為：
序列1上游引物(MDV1-UL19-F)：5′-attcctggat gcaaacccgt-3′20
序列2下游引物(MDV1-UL19-R)：5′-tattccacgt tccgtcagcc-3′20
序列3Taqman探針(MDV1-UL19-P)：5′-HEX-agcctgccat cagcgcgtat-BHQ1-3′20；
所述標準品質粒為將基因合成所述引物針對的目的片段連接到pEASY-Blunt載體得到的。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒使用的熒光定量PCR反應體系為20.0μL，包含：10.0μL qPCR Buffer(2×)、0.4μL酶、0.4μL上游引物、0.4μL下游引物、0.2μL探針、3.0μL模板和5.6μL無酶水；
反應條件為：95℃預變性2min；95℃變性3sec，60℃退火15sec，72℃延伸20sec，擴增40個循環，收集熒光信號。
3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒用于檢測馬立克氏病病毒血清1型毒株時，按照以下步驟進行：
(1)提取待檢樣品的總DNA；
(2)將標準品質粒做3.28×108copies/μL到3.28×100copies/μL 10倍系列稀釋后作為模板，所述的特異性引物、探針、反應體系和條件進行熒光定量PCR，建立標準曲線；
(3)以步驟(1)提取的總DNA為模板，以所述的特異性引物、探針、反應體系和條件進行熒光定量PCR；
(4)根據標準曲線對待檢樣品中的病毒拷貝數進行定量；
(5)若用于定性檢測，則無需構建標準曲線。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國獸醫藥品監察所，未經中國獸醫藥品監察所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010794930.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
