[發(fā)明專利]一種拮抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌LRa05、篩選方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010793756.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112210507B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方曙光;嚴(yán)濤;陳珂可;朱建國(guó);馮勝鵬;程文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇微康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A23L33/135;A23L33/21;A23L33/125;C12R1/225
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 趙穎

本發(fā)明公開(kāi)了一種鼠李糖乳桿菌LRa05，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC 1.12734；對(duì)志賀氏菌具有良好的拮抗作用，其拮抗能力優(yōu)于普通常用的乳桿菌和商業(yè)菌株鼠李糖乳桿菌LGG；并且具有良好的耐酸、耐膽鹽的特性；鼠李糖乳桿菌LRa05制備的保健食品，其動(dòng)物試驗(yàn)及人體試驗(yàn)結(jié)果表明，可有效緩解志賀氏菌引起的腹痛、腹瀉、發(fā)燒等癥狀；另外，鼠李糖乳桿菌屬于益生菌，已納入可應(yīng)用于食品名單目錄中的安全菌株，安全性優(yōu)異，可替代傳統(tǒng)抗生素使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種拮抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌LRa05、篩選方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

志賀氏菌屬(Shigella Castellani)是一類革蘭氏陰性短小桿菌，是人類細(xì)菌性痢疾最為常見(jiàn)的病原菌，屬于腸桿菌科，分4個(gè)群：痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌和宋內(nèi)氏志賀氏菌。無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，多數(shù)有菌毛。是人和靈長(zhǎng)類動(dòng)物的腸道致病菌，引起細(xì)菌性痢疾。每年全球感染志賀氏菌的人數(shù)高達(dá)2億，每年有上百萬(wàn)的人需要住院治療，其中很大部分的致死病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。每年可導(dǎo)致多達(dá)五十萬(wàn)人死亡。志賀氏桿菌導(dǎo)致的痢疾主要是由于腸道上皮粘膜被破壞(特別是盲腸和直腸)。一些系可以產(chǎn)生腸毒素和志賀氏毒素，與大腸桿菌細(xì)菌外毒素類似，最常見(jiàn)的癥狀是腹瀉(水腹瀉)、發(fā)燒、惡心、嘔吐、胃抽筋、腸胃氣脹和便秘。

一般針對(duì)志賀氏菌所引起的病癥，主要是采用抗生素來(lái)進(jìn)行治療，如氨芐青霉素、氯霉素等，但是采用抗生素，極易導(dǎo)致志賀氏菌產(chǎn)生抗藥性，破壞正常的腸道菌群平衡，而且隨著抗生素的濫用會(huì)產(chǎn)生的“超級(jí)細(xì)菌”，其抗生素的使用越來(lái)越受到人們的重視及慎用。

腸道微生態(tài)療法是最近許多研究學(xué)者所進(jìn)行研究的一個(gè)熱點(diǎn)，尤其是對(duì)乳酸菌的研究。乳酸菌是一類能夠使碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的統(tǒng)稱，廣泛存在于自然發(fā)酵乳制品、發(fā)酵傳統(tǒng)食品及人腸道中，乳酸菌能調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，控制內(nèi)毒素，抑制腸道內(nèi)致病菌的的生長(zhǎng)繁殖，從而對(duì)機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、生理功能、藥物效應(yīng)、免疫反應(yīng)等產(chǎn)生有益的影響，其屬于腸道中的有益菌，拮抗其它致病菌的生長(zhǎng)，無(wú)毒副作用，不產(chǎn)生耐藥性，但由于不同菌株之間其生理生化特性、抑菌特性不相同，目前暫時(shí)還沒(méi)有專門針對(duì)拮抗志賀氏菌的乳酸菌的篩選、鑒定及其應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種拮抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌 LRa05、篩選方法及其應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供本一種抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌，命名為L(zhǎng)Ra05，已于2020 年7月20日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC 1.12734，分類命名為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。

進(jìn)一步地，所述鼠李糖乳桿菌LRa05的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

進(jìn)一步地，所述鼠李糖乳桿菌LRa05的pheS基因序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

所述鼠李糖乳桿菌LRa05的菌株特征為：革蘭氏陽(yáng)性菌，桿狀，成鏈狀，無(wú)鞭毛，無(wú)莢膜，不運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧菌，最適溫度一般是30-40度，菌落呈圓形，顏色為乳白色，表面光滑不透明，邊緣整齊。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌LRa05的篩選方法，依次通過(guò)樣品的采集、分離、純化、鑒定、保存等試驗(yàn)，最終篩選出拮抗志賀氏菌的鼠李糖乳桿菌LRa05。具體包括如下步驟：

樣品采集，先將從采集的傳統(tǒng)發(fā)酵食品做前處理，取25mL的樣品加入至 225mL的滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到菌懸液；