[發(fā)明專利]制備Bietti結(jié)晶樣萎縮非人哺乳動(dòng)物模型的方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010793683.6
• 申請(qǐng)日: 2020-08-10
• 公開（公告）號(hào): CN111979271A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪楓樺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海朗昇生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/89
• 分類號(hào): C12N15/89;A01K67/027
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中

1.制備Bietti結(jié)晶樣萎縮非人哺乳動(dòng)物模型的方法，其特征在于，包括：

使用Crispr-Cas系統(tǒng)將所述動(dòng)物CYP4V3基因敲除轉(zhuǎn)錄本第一個(gè)外顯子敲除；

其中所述Crispr-Cas系統(tǒng)包括sgRNA和Cas9酶，所述sgRNA包括對(duì)應(yīng)的靶位點(diǎn)序列為SEQ ID NO：1和2所示的sgRNA1和sgRNA2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因敲除的對(duì)象為受精卵。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas系統(tǒng)以sgRNA和Cas9 mRNA的形式轉(zhuǎn)入所述受精卵。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述Crispr-Cas系統(tǒng)轉(zhuǎn)入所述受精卵的方法為顯微注射。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將處理后受精卵移植到假孕雌性動(dòng)物體內(nèi)并產(chǎn)出F0代，將正確敲除CYP4V3基因的F0代動(dòng)物與野生型動(dòng)物交配獲得F1代雜合子動(dòng)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將所述F1代雜合子動(dòng)物自交獲得F2代純合子動(dòng)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～3、5、6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述非人哺乳動(dòng)物為嚙齒類動(dòng)物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述非人哺乳動(dòng)物是小鼠(Musmusculus)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～3、5、6、8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法不引入可穩(wěn)定表達(dá)的外源基因。

10.權(quán)利要求1～9任一項(xiàng)所述方法得到的動(dòng)物在鑒別和/或測(cè)試藥物中的用途；

所述藥物用于預(yù)防和/或治療的適應(yīng)癥為Bietti結(jié)晶樣萎縮和/或治療與Bietti結(jié)晶樣萎縮相關(guān)的并發(fā)癥。