[發明專利]在體外克隆中分選核酸和多重制備物的方法

在審

• 申請號: 202010793149.5
• 申請日: 2013-04-24
• 公開（公告）號: CN111876409A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: J·雅各布森;M·J·戈德伯格;L-Y·A·昆;D·辛德勒;M·E·赫德森
• 申請（專利權）人: GEN9股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種分選具有預定序列的核酸分子的方法，所述方法包括：

(a)提供包含至少兩個核酸分子群的核酸分子集合，各核酸分子群具有

(i)對各群而言相同的獨特目標核酸序列，所述目標核酸序列具有兩個末端；

(ii)位于各目標核酸分子兩端的非目標寡核苷酸標簽序列對，由此在所述核酸分子集合中各個寡核苷酸標簽序列包含針對各目標核酸序列的獨特部分；其中，所述集合是用非目標寡核苷酸標簽序列文庫給目標核酸分子加標簽制得的，所述非目標寡核苷酸標簽序列的數量大于所述目標核酸分子的數量；

(b)對所述目標核酸分子進行從兩個末端開始的測序從而得到成對末端讀取；并且

(c)按照它們相應的成對末端讀取值來分選具有預定序列的核酸分子。

2.如權利要求1所述的方法，還包括擴增所述具有預定序列的核酸分子。

3.如權利要求2所述的方法，還包括用引物擴增所述具有預定序列的核酸分子，所述引物與所述寡核苷酸標簽序列的至少部分互補。

4.如權利要求1所述的方法，其中，所述目標核酸分子包含第一目標核酸分子群和第二目標核酸分子群，所述第一目標核酸分子群具有所述預定序列，所述第二目標核酸分子群具有不同于所述預定序列的序列。

5.如權利要求4所述的方法，還包括在固相支持物上組裝眾多目標核酸分子并匯集所述目標核酸分子。

6.如權利要求5所述的方法，還包括稀釋目標核酸分子。

7.如權利要求1所述的方法，還包括稀釋所述核酸分子集合。

8.如權利要求1所述的方法，其中，所述非目標寡核苷酸標簽序列連接在各目標核酸分子的兩端。

9.如權利要求8所述的方法，其中，通過將所述目標核酸分子與一個或多個包含所述非目標寡核苷酸標簽序列的核酸分子連接將所述非目標寡核苷酸標簽序列加到所述目標核酸分子上。

10.如權利要求9所述的方法，其中，所述一個或多個包含所述非目標寡核苷酸標簽序列的核酸分子是載體。

11.如權利要求1所述的方法，其中，在提供加標簽的步驟中，所述非目標寡核苷酸標簽序列通過聚合酶鏈反應與各個所述目標核酸分子的兩端連接。

12.如權利要求1所述的方法，其中，各個非目標寡核苷酸標簽序列包括簡并核苷酸序列或部分簡并序列。

13.如權利要求12所述的方法，其中，所述簡并核苷酸序列是CCWSWDHSHDBVHDNNNNMM和/或CCSWSWHDSDHVBDHNNNNMM，其中，W代表A或T，S代表G或C，M代表A或C，B代表C、G或T，D代表A、G或T，H代表A、C或T，V代表A、C或G，N代表任意堿基A、C、G或T。

14.如權利要求2所述的方法，其中，所述擴增步驟中，引物與非目標寡核苷酸標簽序列對互補。