[發(fā)明專利]表皮干細胞向胰腺細胞分化的改進方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010792164.8 | 申請日： | 2018-09-03 |
| 公開（公告）號： | CN111848743B | 公開（公告）日： | 2021-05-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊駿;張勇 | 申請（專利權(quán)）人： | 吉林省匯融生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/00 | 分類號： | C07K14/00;C12N5/071;C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京華仁聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11588 | 代理人： | 周明新 |
| 地址： | 130122 吉林省*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 表皮 干細胞 胰腺 細胞 分化 改進 方法 | ||
1.一種活性刺激肽，其序列如SEQ ID NO：6所示。
2.權(quán)利要求1所述的活性刺激肽在用于促進表皮干細胞向胰腺細胞分化中的應(yīng)用。
3.一種表皮干細胞向胰腺細胞分化的方法，具體包括以下步驟：
第一步，將表皮干細胞放至1％Matrigel鋪被的培養(yǎng)皿中按照如下方法用活性刺激肽誘導：
兩小時后，表皮干細胞開始鋪展，此時將培養(yǎng)基換為含有10％胎牛血清和100ng/mlactivin A的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，然后表皮干細胞轉(zhuǎn)為用含10％胎牛血清以及1-10mg/L如權(quán)利要求1所述的活性刺激肽的DMEM培養(yǎng)6-8小時使表皮干細胞分化，之后，分化表皮干細胞接著用含有10％胎牛血清和1×10-6mol/L RA的 DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)誘導24小時，得到胰腺前體細胞；
第二步，胰島前體細胞的擴增；
分化的表皮干細胞用含有10％胎牛血清和8-12ng/ml bFGF的DMEM培養(yǎng)3- 5天，誘導來源于表皮干細胞的胰腺前體細胞的擴增，在此期間，大部分貼壁的細胞呈現(xiàn)上皮樣結(jié)構(gòu)；
第三步，胰腺β細胞(Pancreatic βcell)的成熟。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述bFGF的濃度為10ng/ml。
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