[發明專利]一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010791045.0
• 申請日: 2020-08-07
• 公開（公告）號: CN111965278A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 朱方容;陶程;李韜;邱長玉;崔秋英;林強;朱光書;王霞;陳芳;石華月
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區蠶業技術推廣站
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 符繼超

1.一種1-脫氧野尻霉素衍生化試劑盒，包括盒身以及與所述盒身鉸接的盒蓋，其特征在于，所述盒身內固定有瓶架，所述瓶架頂面向內形成凹槽，所述凹槽內安裝有第一標準液瓶、第二標準液瓶、第三標準液瓶、第四標準液瓶、第五標準液瓶、第六標準液瓶、A液瓶、B液瓶、C液瓶和D液瓶。

2.一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，包括如下步驟

(1)將桑枝粉碎，得到樣本粉末密封，測定樣本粉末的含水率；

(2)采用超純水浸溶樣本粉末，依次經過超聲、離心處理，得待測樣品提取液；

(3)取待測樣品提取液采用權利要求1公開的衍生化試劑盒進行衍生化處理，得到待測液；

(4)利用液相色譜儀檢測1-脫氧野尻霉素衍生化試劑盒的標準液，將檢測結果與標準液建立標準曲線，再將待測液經過液相色譜儀檢測得到峰面積，根據檢測得到的峰面積與標準曲線確定桑枝中1-脫氧野尻霉素的含量。

3.根據權利要求1所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(1)中所述桑枝包括一年生桑樹枝條或半年生及以上桑樹冬伐或夏伐的枝條；所述桑樹包括桂桑優12、桂桑優62、桑特優2號、桂桑5號或桂桑6號的桑樹；所述粉碎過程設定技術參數粉碎至60目，共進行2～3次；取0.1-3g樣本粉末加入至水分測定儀進行測定，得樣本粉末的含水率。

4.根據權利要求1所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(2)中所述超純水按照固液比為0.5：35(g/mL)加入；所述超聲波處理的溫度為50℃、時間為2h-3h；所述離心的轉速為3500r-4000r/min，時間為4min-8min。

5.根據權利要求1所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(3)中將待測樣品提取液與所述1-脫氧野尻霉素衍生化試劑盒的A液及B液混合均勻，恒溫反應；然后加入C液終止衍生化，最后加D液酸化。

6.根據權利要求5所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(3)中所述A液加入至待測樣品提取液后，與B液、C液和D液的體積比為1：1：2：10；所述恒溫反應的溫度是25℃，時間為20min。

7.根據權利要求6所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，所述A液采用PH為8-9、濃度為0.4mol/L的硼酸鉀液；

所述B液為5mol/L芴甲氧羰酰氯溶液，所述芴甲氧羰酰氯溶液采用50％的乙腈-水混合液溶解芴甲氧羰酰氯制備得到；

所述C液為1mol/L的甘氨酸溶液；

所述D液為質量分數為0.1％的乙酸溶液。

8.根據權利要求7所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(4)具體為：

(a)將標準液按照步驟(3)所述方法進行衍生化處理，并分別通過0.45μm尼龍膜過濾；

(b)將經過衍生化處理的標準溶液加入至液相色譜儀中進行檢測，測定條件為：流動相由40％乙腈和60％的乙酸溶液組成，流速為1.0ml/min，進樣量10μl，紫外檢測波長為254nm；測定得到峰面積，重復檢測多次，取平均值；將檢測得到的峰面積和標準液的濃度建立標準方程；

(c)將待測液經過0.45μm尼龍膜過濾后加入至液相色譜儀進行檢測，流動相由40％乙腈和60％的乙酸溶液組成，流速為1.0ml/min，進樣量10μl，紫外檢測波長為254nm；測定得到峰面積，重復檢測多次，取平均值得待測樣品峰面積；

(d)根據待測樣品峰面積和標準方程計算得到待測液中DNJ含量；

(e)由待測液中DNJ含量、待測樣品粉末含水率計算得到桑枝中DNJ含量。

9.根據權利要求8所述的一種檢測桑枝中1-脫氧野尻霉素含量的方法，其特征在于，步驟(b)和步驟(c)中乙酸溶液的質量百分比為0.1％。