[發(fā)明專利]血液中銅同位素豐度比的檢測(cè)方法及其作為膀胱癌標(biāo)志物的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010788388.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111999373A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉倩;王偉超;陸達(dá)偉;江桂斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62;G01N1/28
• 代理公司: 北京卓恒知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11394
• 代理人: 唐曙暉;劉明芳

1.血液中銅同位素豐度比值的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)樣品的消解處理

分別取1mL血漿和血細(xì)胞待測(cè)樣品于特氟龍消解管內(nèi)，加入7mL的14M HNO₃和1mL 30％H₂O₂,放入微波消解儀內(nèi)進(jìn)行消解處理，處理后取消解液備用；

2)待測(cè)液體的換基質(zhì)處理

將上述消解后液體轉(zhuǎn)移至特氟龍趕酸碗，在140攝氏度加熱板上進(jìn)行趕酸，等液體蒸干后往趕酸碗里加入2mL的第一HCI和H₂O₂混合液再次蒸干，之后將樣品轉(zhuǎn)移溶解在1mL的第一HCI和H₂O₂混合液中；

3)待測(cè)液體的雜質(zhì)離子分離

將2mL 100–200目的陰離子樹(shù)脂上到交換柱上，用10mL的0.7M HNO₃和10mL的去離子水對(duì)離子交換柱進(jìn)行清洗，然后用10mL的第一HCI和H₂O₂混合液對(duì)柱子進(jìn)行穩(wěn)定處理；之后上樣，并按照下列順序分別進(jìn)行離子洗脫：8mL的第一HCI和H₂O₂混合液洗掉基質(zhì)，12mL的第二HCI和H₂O₂混合液洗下銅離子，7mL的0.6M HCl洗下鐵離子，8mL的0.7M HNO₃洗下鋅離子；

4)除去待測(cè)液體的氯離子

取上述洗下銅離子的待測(cè)液體放入特氟龍趕酸碗中，于140℃蒸干，加入2mL 5％HNO₃再次蒸干，之后將其轉(zhuǎn)移溶解在5％HNO₃中即可得到基質(zhì)簡(jiǎn)單的銅離子待測(cè)溶液；

5)多接收器電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)試

銅同位素比率用δ⁶⁵Cu(‰)表示，δ⁶⁵Cu(‰)的計(jì)算公式為：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中的陰離子樹(shù)脂需提前24小時(shí)進(jìn)行活化處理。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)中進(jìn)行洗脫分離元素時(shí)需緩慢滴加洗脫液，降低對(duì)陰離子樹(shù)脂的影響。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)、步驟4)中的第一HCI和H₂O₂混合液通過(guò)在8M HCI里滴加30％的過(guò)氧化氫，使混合溶液的H₂O₂含量達(dá)到0.001％制得。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟4)中的第二HCI和H₂O₂混合液通過(guò)在5M HCI里滴加30％的過(guò)氧化氫，使混合溶液的H₂O₂含量達(dá)到0.001％制得。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一所述的方法，其特征在于，在步驟1)之后，還包括：

a)電感耦合等離子體質(zhì)譜測(cè)試

定容后將上述消解液取出200uL稀釋20倍后利用ICP-MS進(jìn)行濃度測(cè)定，獲得銅濃度數(shù)據(jù)，用于二維分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)中使用MC-ICP-MS進(jìn)行同位素比值分析，選擇L2法拉第杯接收⁶³Cu信號(hào)，選擇H2法拉第杯接收⁶⁵Cu信號(hào)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，采用標(biāo)品-樣品-標(biāo)品法進(jìn)行銅同位素檢測(cè)分析。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8之一所述的方法測(cè)得的銅同位素作為膀胱癌標(biāo)志物的應(yīng)用。