[發明專利]血液中銅同位素豐度比的檢測方法及其作為膀胱癌標志物的應用

在審

• 申請號: 202010788388.1
• 申請日: 2020-08-07
• 公開（公告）號: CN111999373A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 劉倩;王偉超;陸達偉;江桂斌
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28
• 代理公司: 北京卓恒知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11394
• 代理人: 唐曙暉;劉明芳

本發明公開一種血液中銅同位素豐度比的檢測方法及其作為膀胱癌標志物的應用。本方法將血漿和血細胞消解后，利用ICP?MS對血液中銅濃度進行測定分析。之后進行銅元素純化處理并利用MC?ICP?MS進行銅同位素分析。該方法可以排除生物基質的干擾，使得血液中的銅同位素能夠準確測定。通過對比癌癥患者、良性病人和正常人的銅同位素比值，發現癌癥患者相對于正常人，血液中銅同位素比值偏低，傾向于富集較輕的⁶³Cu。該方法能對生物基質中銅同位素進行精確測定，具有檢測快速靈敏、對人體無侵害性等優點。

技術領域

本發明涉及生物分析領域，具體涉及一種血液中銅同位素豐度比的檢測方法及其作為膀胱癌標志物的應用。

背景技術

銅是生命必需的微量元素，有氧化態和還原態兩種。膳食銅可通過銅轉運蛋白1(Ctr1)在腸道中得到進一步利用。在細胞中，當細胞內銅含量較低時，銅主要借助Ctr1進入細胞內。但當細胞內銅含量較高時，細胞通過ATP7A和ATP7B排出多余的銅。膽汁是人類排泄銅最重要的途徑，其比例甚至可達80％。

銅在人體內的代謝通常保持平衡，直到體內微環境發生變化，銅代謝發生失衡，趨于過量或者缺失。銅缺失與貧血，毛發異常，骨骼改變等相關疾病密切相關，而銅過量則與肝硬化、運動智障、知覺神經智障以及癌癥等疾病密切相關。

膀胱癌是世界上發生率最高的腫瘤之一，也是泌尿系統中最常見的惡性腫瘤，目前對于膀胱癌的診斷主要是通過形態學和病理學標準，而關于無侵害性的膀胱癌診斷手段研究較少。人體內微量元素銅與癌癥密切相關，那么是否可以借助銅元素來對癌癥進行監測和診斷逐漸成為了研究熱點。因此對膀胱癌患者的銅代謝水平進行探究則具有重要的意義。

本申請的發明人發現：血液中的銅同位素檢測存在著生物基質干擾，可能對銅同位素檢測的精度產生影響，同時目前的銅同位素測定方法對于生物基質的干擾缺乏驗證；傳統的研究在觀察膀胱癌患者體內銅代謝變化時主要關注于銅總量水平是否發生異常，但是銅總量的變化不夠靈敏且帶來的信息往往很有限，不能及時準確地對膀胱癌進行標志。

發明內容

本發明提供一種運用銅同位素對血液中膀胱癌標志物進行探究的方法。借助同位素技術對膀胱癌患者血液中銅同位素進行檢測，探究銅同位素作為膀胱癌潛在標志物的可能。

本發明為解決其技術問題而提出的技術方案為：

血液中銅同位素豐度比的檢測方法，包括如下步驟：

1)樣品的消解處理

分別取1mL血漿和血細胞待測樣品于特氟龍消解管內，加入7mL的14M HNO₃和1mL30％H₂O₂,放入微波消解儀內進行消解處理，處理后取消解液備用；

2)待測液體的換基質處理

將上述消解后液體轉移至特氟龍趕酸碗，在140攝氏度加熱板上進行趕酸，等液體蒸干后往趕酸碗里加入2mL的第一HCI和H₂O₂混合液再次蒸干，之后將樣品轉移溶解在1mL的第一HCI和H₂O₂混合液中；

3)待測液體的雜質離子分離

將2mL 100–200目的陰離子樹脂上到交換柱上，用10mL的0.7M HNO₃和10mL的去離子水對離子交換柱進行清洗，然后用10mL的第一HCI和H₂O₂混合液對柱子進行穩定處理；之后上樣，并按照下列順序分別進行離子洗脫：8mL的第一HCI和H₂O₂混合液洗掉基質，12mL的第二HCI和H₂O₂混合液洗下銅離子，7mL的0.6M HCl洗下鐵離子，8mL的0.7M HNO₃洗下鋅離子；