[發明專利]牛乳鐵蛋白雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條、制備方法、試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202010788382.4
• 申請日: 2020-08-07
• 公開（公告）號: CN111896749A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 邵儷黎;趙啟皓;許叢文;王宏;陳宗倫;蔡菁華;戴仙兵;黃佳娟;鐘文茵
• 申請（專利權）人: 杭州都林生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 杭州凱知專利代理事務所(普通合伙) 33267
• 代理人: 金國棟

本發明提供了一種牛乳免疫球蛋白(IgG)雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條、制備方法、試劑盒和檢測方法。膠體金免疫層析試紙條，其特征是，包括底板、以及重疊設置在PVC底板上的吸水墊、層析膜、結合物釋放墊和樣品墊，結合物釋放墊上包被有膠體金標記的牛乳鐵蛋白抗體a復合物，層析膜上設有一條檢測線和一條質控線，所述檢測線包被有抗牛乳鐵蛋白抗體b，所述質控線包被有羊抗鼠IgG。本發明同時提供了所述層析試紙條的制備方法，和包括該試劑條的試劑盒，以及該試劑盒進行檢測的方法。本發明的技術方案基于雙抗體夾心膠體金顯色以及金標免疫分析儀定量的原理制成，可用來快速定量檢測牛乳鐵蛋白(IgG)含量。

技術領域

本發明涉及檢測試劑條、試劑盒領域，尤其涉及一種牛乳鐵蛋白雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條，該試劑條的制備方法，和包括該試劑條的試劑盒，以及該試劑盒進行檢測的方法。

背景技術

乳鐵蛋白(Lactoferrin,LF)是一種分子量約為80kDa的鐵結合糖蛋白，屬于糖蛋白家族成員，于1938年首次從牛乳中分離得到，直到1960年，Johansson等人從人乳中分離出乳鐵蛋白，主要存在于人和動物的乳汁中，是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結合糖蛋白。乳鐵蛋白屬于堿性蛋白，可與一些金屬陽離子、生物大分子等特異性或非特異性結合，作為一種新型的天然營養蛋白質，具有人體所需的多種氨基酸，具有一系列的生物學功能，不但可以參與鐵的轉運，促進鐵的吸收，還具有抗菌、殺菌、抗病毒以及調節機體免疫等多種功能，因此被廣泛用于醫學和食品領域，尤其是作為食品添加劑用于乳制品及其配方食品。由于乳制品產品眾多，質量參差不齊，因此亟需方便快速并且可以精準定量的檢測方法。

目前，乳鐵蛋白的主要檢測方法為高效液相色譜法(HPLC)、電泳法以及酶聯免疫吸附法(ELISA)，HPLC方法具有準確度高，可重復并且準確定量的特點，但是儀器復雜，樣品需要前處理，并且檢測時間長；電泳法主要包括聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和高效毛細管電泳法(HPCE)，SDS-PAGE方法準確度高，重復性好，但是操作步驟繁瑣，檢測時間長；HPCE方法操作簡單，但是結果重復性較差；ELISA方法通量高，相較于儀器方法步驟簡單方便，但是同樣耗時且靈敏度較低，容易出現假陰性，不適合現場快速篩查；膠體金免疫層析方法目前已經廣泛應用于藥物、疾病檢測領域，但是在牛乳鐵蛋白檢測中還未有報道。

發明內容

本發明是為了克服現有技術中的牛乳鐵蛋白檢測領域的上述不足之處，且無法實現高通量處理的不足之處，提供一種牛乳鐵蛋白雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條、制備方法、試劑盒和檢測方法，可對樣品中的牛乳鐵蛋白實現快速定量檢測，極大的縮短了檢測時間，并可實現大批量樣品的快速準確篩查。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的牛乳鐵蛋白雙抗體夾心膠體金免疫層析試紙條，包括底板、以及重疊設置在底板上的吸水墊、層析膜、結合物釋放墊和樣品墊，結合物釋放墊上包被有膠體金標記的牛乳鐵蛋白抗體a復合物，層析膜上設有一條檢測線和一條質控線，所述檢測線包被有抗牛乳鐵蛋白抗體b，所述質控線包被有羊抗鼠IgG。

作為優選，層析膜上的檢測線包被有濃度為0.5-2mg/mL的抗牛乳鐵蛋白抗體b，層析膜上的質控線包被有濃度為0.5-1mg/mL的羊抗鼠IgG。

作為優選，所述抗牛乳鐵蛋白抗體a和抗牛乳鐵蛋白抗體b同為抗牛乳鐵蛋白單克隆抗體或抗牛乳鐵蛋白多克隆抗體或抗牛乳鐵蛋白重組抗體中的一種。

作為優選，所述抗牛乳鐵蛋白抗體a和抗牛乳鐵蛋白抗體b同為抗牛乳鐵蛋白單克隆抗體。