[發明專利]一種新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202010787913.8 | 申請日： | 2020-08-07 |
| 公開（公告）號： | CN111849947A | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發明（設計）人： | 馮翠;任立世;張毓宸;焦思明;王穎;程功;孫明;杜昱光 | 申請（專利權）人： | 中科榮信（蘇州）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/80 | 分類號： | C12N9/80;C12N15/55;C12N15/81;C12P19/26;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251 | 代理人： | 郭桂峰 |
| 地址： | 215152 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 新型 球菌 幾丁質 乙酰 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶，其特征在于：所述新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶的氨基酸序列選自以下其中一種：
(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(2)對SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列進行一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加修飾且具有相同功能的氨基酸序列；
(3)與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有80％以上同源性且具有相同功能的氨基酸序列。
2.如權利要求1所述的一種新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶，其特征在于：所述新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶的氨基酸序列選自與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有90％以上同源性且具有相同功能的氨基酸序列；更優選地，具有95％以上的同源性。
3.一種新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶基因，其特征在于：編碼權利要求1所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶。
4.如權利要求3所述的一種新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶基因，其特征在于：該基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一種重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體包含權利要求3或4所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶基因。
6.如權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于：所述表達載體為pGBG1，表達載體pGBG1通過如下方式獲得：
將表達載體pPIC9中如SEQ ID NO.4所示的信號肽序列進行密碼子優化，獲得適合在畢赤酵母中表達的信號肽序列如SEQ ID NO.5所示；
利用Nsi I/Xho I雙酶切，將表達載體pPIC9中如SEQ ID NO.4所示的序列替換為如SEQID NO.5所示的信號肽序列，得到表達載體pGBG1。
7.權利要求1所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶的制備方法，該方法為：將權利要求3或4所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶基因構建至表達載體中，然后導入畢赤酵母細胞，誘導并獲得分泌表達的幾丁質脫乙酰酶。
8.如權利要求7所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶的制備方法，其特征在于：所述畢赤酵母為GS115。
9.如權利要求7所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
(1)將核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶殼聚糖酶基因進行全合成并構建至表達載體pGBG1中；
(2)對前述構建的表達載體pGBG1進行酶切線性化后，舍棄含有抗性基因的片段，回收含有幾丁質脫乙酰酶基因的片段；
(3)將獲得的含有幾丁質脫乙酰酶基因的表達載體導入畢赤酵母細胞GS115中，誘導培養，獲得分泌表達的幾丁質脫乙酰酶。
10.權利要求1所述的新型隱球菌幾丁質脫乙酰酶在幾丁質、殼聚糖或殼寡糖脫乙酰中的應用。
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