[發明專利]應用MLPA檢測細胞遺傳學異常的方法及試劑盒在審
| 申請號： | 202010787725.5 | 申請日： | 2020-08-07 |
| 公開（公告）號： | CN112553310A | 公開（公告）日： | 2021-03-26 |
| 發明（設計）人： | 安剛;邱錄貴;閻禹廷;于珍;秦小琪;藏美蓉 | 申請（專利權）人： | 中國醫學科學院血液病醫院（中國醫學科學院血液學研究所） |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 馬云華 |
| 地址： | 300000 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 應用 mlpa 檢測 細胞 遺傳學 異常 方法 試劑盒 | ||
1.一種應用MLPA檢測細胞遺傳學異常的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)分別分離細胞檢測樣本和細胞參照樣本中的單個核細胞，制備為細胞懸液；
2)將所述細胞懸液與CD138磁珠混合分選獲得CD138陽性漿細胞；
3)提取所述CD138陽性漿細胞的基因組DNA；
4)將所述基因組DNA變性后，與MLPABuffer和MPLAprobe mix混合進行MLPA反應獲得MLPA產物；
5)將所述MLPA產物與連接酶混合液混合進行連接獲得連接產物；
6)將所述連接產物和PCR聚合酶混合液混合進行PCR擴增獲得PCR擴增產物；
7)對所述PCR擴增產物進行毛細管電泳，比較細胞檢測樣本和細胞參照樣本的毛細管電泳結果分析細胞遺傳學異常；當所述細胞檢測樣本的毛細管電泳結果在所述細胞參照樣本的毛細管電泳結果范圍內，認為該細胞遺傳學正常，否則認為該細胞遺傳學異常。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述的基因組DNA的A260/A280為1.6～1.9；所述基因組DNA的濃度為20～30ng/μl。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)中所述變性的程序為98℃，5min變性；25℃，10min；所述變性后的基因組DNA、MLPABuffer和MPLAprobe mix的體積比為5：1.5：1.5。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述MLPA反應的程序為95℃，1min；60℃，16～20h。
5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述MPLAprobe mix包括核苷酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.53所示的探針。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述MLPA產物與連接酶混合液的體積比為1：4；所述連接的程序為54℃，15min；98℃，5min；20℃保持。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6)所述的連接產物和PCR聚合酶混合液的體積比為4：1；所述PCR擴增的程序如下：95℃、30s；60℃、30s，72℃、60s，35個循環；72℃、20min；15℃停止。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞檢測樣本和細胞參照樣本的數量比為(7～15)：1。
9.應用MLPA檢測細胞遺傳學異常的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1中所述的MPLAprobe mix。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1中所述的PCR聚合酶混合液；所述PCR聚合酶混合液包括PCR擴增引物。
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