[發明專利]一種玉米品種抗莖基腐病人工接種鑒定方法

有效

• 申請號: 202010785027.1
• 申請日: 2020-08-06
• 公開（公告）號: CN111748603B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 李永剛;扈光輝;劉金鑫;任洪雷;胡少新
• 申請（專利權）人: 東北農業大學;黑龍江省農業科學院玉米研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;A01H1/04
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 孫光遠

1.一種玉米品種抗莖基腐病人工接種鑒定方法，其特征在于，包括下列步驟：

(1)孢子懸浮液的配制：將樣本菌培養制備孢子懸浮液備用；

(2)玉米抗性資源的準備：種植玉米，待玉米長至6～8葉期接種；

(3)接種：用注射器在距離地面1?.2～1?.7cm、注射器針頭與莖成45°插入到莖的中心位置并縮回0?.18～0?.22cm后，注入1?.4～1?.6ml步驟(1)所述孢子懸浮液；

(4)統計數據：待接種25d后，統計植株發病情況，計算病情指數，并按病情指數確定抗感類型；

步驟(1)樣本菌的來源：市售代表菌株或經組織分離法對病株組織分離培養鑒定得到；

所述組織分離法對病株分離培養：取病健交接部分的組織，置于酒精中浸泡，取出置于升汞中浸泡，再經無菌水換洗，曬干后轉移至PDA平板上封口，置于25～27℃環境，黑暗培養2～3d，挑取菌落進行純化，備用；

所述酒精為質量體積比75％酒精，浸泡時間2～3s，所述升汞質量體積比0?.1％，浸泡時間2～3min；

步驟(1)培養的具體步驟依次為：將樣本菌株在PDA培養基上培養5～7d；更換培養基接種并培養5d后用無菌水沖洗得孢子懸浮液并用雙層紗布過濾；調整孢子懸浮液濃度為1×10⁶孢子/ml；

所述更換培養基：更換為高粱培養基，所述高粱培養基的制備方法：將高粱粒用水于100℃加熱20min；再轉移至三角瓶中經121℃、時間45min滅菌；

所述接種并培養5d后用無菌水沖洗得孢子懸浮液：每個三角瓶中接種5～7個直徑7mm菌碟；置于26℃環境黑暗培養，每天振蕩三角瓶1～2次；待菌絲長滿每個高粱粒的表面，用無菌水沖洗帶菌的高粱粒得孢子懸浮液。

2.如權利要求1所述的一種玉米品種抗莖基腐病人工接種鑒定方法，其特征在于，步驟(2)所述種植玉米：5月初，將待檢測當地優勢種植的玉米品種或品系種植到田間，每個玉米品種或品系3次重復，隨機排列在田間，每個重復30株。

3.如權利要求2所述的一種玉米品種抗莖基腐病人工接種鑒定方法，其特征在于，步驟(3)所述注射器為耐爾尼三用注射器，并調節注射器每次注射量為1?.5ml。