[發明專利]一種大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品、制備方法及其應用在審
| 申請號： | 202010781186.4 | 申請日： | 2020-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN111876504A | 公開（公告）日： | 2020-11-03 |
| 發明（設計）人： | 陳瑤;許龍巖;袁慕云;郝文波;劉二龍 | 申請（專利權）人： | 南方醫科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 張換君 |
| 地址： | 510515 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 大腸桿菌 o157 核酸 檢測 質粒 dna 參考 樣品 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，采用包含來源于不同大腸桿菌O157菌株的uidA、eaeA、Stx1、Stx2、rfbE和flicH7全長基因的片段插入質粒中形成；
所述大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述uidA、eaeA、Stx1、Stx2、rfbE和flicH7基因以1:1比例串聯；
所述uidA、eaeA、Stx1、Stx2、rfbE和flicH7基因間以不相關的基因片段進行隔開。
2.根據權利要求1所述的大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，在260nm和280nm處的光密度值比值在1.8-2.0之間。
3.根據權利要求1所述的大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，所述不相關的基因片段的核苷酸序列為aagtcg。
4.一種權利要求1-3任一項所述的大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品的制備方法，其特征在于，包括：
人工合成大腸桿菌O157基因udia、rfbE、flicH7、stx1、stx2、eaeA，基因之間用所述不相關的基因片段間隔；
合成后克隆插入質粒中，經大腸桿菌擴增后，提取并提純質粒；
測定濃度并分裝；-70℃預凍，經升華和再干燥后，得到凍干粉，即所述大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述質粒為pUC57載體質粒。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括對核酸標準樣品定性鑒定，通過特異性引物進行PCR擴增或測序進行定性分析，來確認所制備的質粒參考品包含完整和準確的目的DNA。
7.一種權利要求1-3任一項所述的大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品在檢測大腸桿菌O157中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，在進行大腸桿菌O157檢測時，所述大腸桿菌O157核酸檢測質粒DNA參考樣品作為參考品或對照品。
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