[發明專利]一種沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品、制備方法及其應用在審
| 申請號： | 202010781165.2 | 申請日： | 2020-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN111850150A | 公開（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發明（設計）人： | 袁慕云;許龍巖;陳瑤;郝文波;劉二龍 | 申請（專利權）人： | 廣州海關技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/63;C12N15/31;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 張換君 |
| 地址： | 510623 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 沙門氏菌 核酸 檢測 質粒 dna 參考 樣品 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；
其采用包含來源于不同沙門氏菌菌株的腸傷寒特異性序列se、鼠傷寒特異性序列st以及共有的aceA基因的片段插入質粒中形成；
所述se、st、aceA基因以1:1:1比例串聯；
所述se、st、aceA基因間以不相關的基因片段進行隔開。
2.根據權利要求1所述的沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，在260nm和280nm處的光密度值比值在1.8-2.0之間。
3.根據權利要求1所述的沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品，其特征在于，所述不相關的基因片段的核苷酸序列為aagtcg。
4.一種權利要求1-3任一項所述的沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品的制備方法，其特征在于，包括：
人工合成沙門氏菌基因se、st、aceA，基因之間用所述不相關的基因片段間隔；
合成后克隆插入質粒中，經沙門氏菌擴增后，提取并提純質粒；
測定濃度并分裝；-70℃預凍，經升華和再干燥后，得到凍干粉，即所述沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述質粒為pUC57載體質粒。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括對核酸標準樣品定性鑒定，通過特異性引物進行PCR擴增或測序進行定性分析，來確認所制備的質粒參考品包含完整和準確的目的DNA。
7.一種權利要求1-3任一項所述的沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品在檢測沙門氏菌中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，在進行沙門氏菌檢測時，所述沙門氏菌核酸檢測質粒DNA參考樣品作為參考品或對照品。
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