[發明專利]雄激素受體剪接變異體-7核酸定量檢測方法、內標及試劑盒

在審

• 申請號: 202010779376.2
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN112029855A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 王曉楠;喬春曉;張亞楠
• 申請（專利權）人: 上海思路迪醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京市蘭臺律師事務所 11354
• 代理人: 張峰

1.一種熒光PCR定量檢測AR-V7的方法，其特征在于，包括：

S1、提供一包括AR-V7和已知濃度或模板量的AR-V7 QS內標的熒光PCR反應體系；

所述熒光PCR反應體系還包括用于檢測AR-V7的上、下游引物及探針，以及用于檢測AR-V7 QS的上、下游引物及探針，其中用于檢測AR-V7的上、下游引物序列分別與用于檢測AR-V7 QS的上、下游引物序列相同；

所述AR-V7 QS包括與所述AR-V7相同的上、下游引物識別序列，以及位于上、下游引物識別序列之間的探針識別序列Ⅰ；所述AR-V7包括位于上、下游引物識別序列之間的探針識別序列Ⅱ；

所述探針識別序列Ⅰ與所述探針識別序列Ⅱ的堿基組成相同而堿基排列順序不同；

S2、進行擴增反應，并檢測AR-V7和AR-V7 QS二者的Ct值，則所述樣本中AR-V7的濃度或模板量采用如下的公式計算，

AR-V7濃度＝(2^ΔCт)×AR-V7 QS濃度，

AR-V7模板量＝(2^ΔCт)×AR-V7 QS模板量，

其中ΔCт為AR-V7 QS的Ct值與AR-V7的Ct值的差值。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于檢測AR-V7 QS的探針序列與所述探針識別序列Ⅰ相同或互補，所述用于檢測AR-V7的探針序列與所述探針識別序列Ⅱ相同或互補。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于檢測AR-V7 QS的上、下游引物序列分別與AR-V7 QS的上、下游引物識別序列相同或互補，所述用于檢測AR-V7的上、下游引物序列分別與AR-V7的上、下游引物識別序列相同或互補。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述探針識別序列Ⅰ與所述探針識別序列Ⅱ中至少4個堿基的排列順序不同。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述AR-V7 QS在除所述探針識別序列Ⅰ之外的區域與所述AR-V7在除所述探針識別序列Ⅱ之外的區域序列相同。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，

所述AR-V7 QS的序列為：

TTGTCCATCTTGTCGTCTTCGGAAATGTTGATAGCAAGAGGGTA

CTCTGGGAGAAAAATTCCGGGTTGGCAATTG，其中下劃線部分為所述探針識別序列Ⅰ。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述用于檢測AR-V7 QS的上、下游引物及探針分別為：

AR-V7 QS上游引物：TTGTCCATCTTGTCGTCTTCG

AR-V7 QS下游引物：CAATTGCCAACCCGGAATTT

AR-V7 QS探針：TGATAGCAAGAGGGTA。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述用于檢測AR-V7的上、下游引物及探針分別為：

AR-V7上游引物：TTGTCCATCTTGTCGTCTTCG

AR-V7下游引物：CAATTGCCAACCCGGAATTT

AR-V7探針：TATGAAGCAGGGATGA。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在50uL的擴增反應體系中所述AR-V7 QS的模板量為50copies。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述AR-V7的濃度或模板量的范圍是：在AR-V7 QS存在的情況下，所述AR-V7的濃度或模板量分別與AR-V7的Ct值線性相關的范圍。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，在50uL的擴增反應體系中，所述AR-V7的模板量在5copies到50000copies之間。